投喂烟酸诺氟沙星后黄颡鱼肠道内细菌耐药性的变化（中）.pdfVIP

投喂烟酸诺氟沙星后黄颡鱼肠道内 细菌耐药性的变化c中) 孟思好 孟长明 陈昌福 (1．河南新乡市康大消毒剂有限公司，河南 新乡 453700； 2．华中农业大学水产学院，湖北 武汉 430070) 4．细菌分离 后，定量吸取0．1毫升浓度约为 1．2x10个细胞 ／毫 在投喂药物饵料结束后的第2天，从每个试验和 升活菌液 (比浊法测定)加入上述每支试管中，摇匀。 对照网箱中各随机捞取5尾黄颡鱼，在无菌条件下， 置于25~C条件下培养72小时，经肉眼观察证实无细 将供试鱼体用酒精消毒后解剖，从其肠道中采样并接 菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最JJ,N菌 种在铺有脑心浸液琼脂培养基 (BHIA，Difco)的平板 浓度 (MIC)。 上，从每尾鱼消化道中分离的细菌接种3个平板。将 6．最小杀菌浓度 (MBC)的测定 接种后的平板置 于25~C恒温培养箱 中培养48小时 从各种药物的MIC浓度以及高于MIC浓度的试管 后，从每尾鱼肠道中接种的3个平板中，共随机挑取 中分别取0．1毫升培养液 ，接种于BHIA(Difco)培养 10个菌落，从3个试验组黄颡鱼消化道中共分离 150 基平皿中，置 36~C条件下培养5天，没有菌落出现的 个菌株 ，对照组黄颡鱼消化道中共分离5O个菌株。 相应试管中的最低药物浓度，即判为这种药物的最小 分别转接在BHIA平板中，在25~C恒温培养箱中进行 杀菌浓度 (MBC)。 分离菌株的纯培养。培养48小时后，用灭菌生理盐 二、结果 水洗下平板中的菌落，并调节细菌浓度为 1×10。个细 1．用药前后菌株MIC的变化 胞 ／毫升，冷藏备用。 试验和对照黄颡鱼消化道中分离菌株对各种抗菌 5．最小抑菌浓度 (MIC)的测定 药物的MIC测定结果如表 l所示 。由表 1可 以看 出， 依 日本化学疗法学会的方法进行。首先将各种抗 烟酸诺氟沙星对从对照组黄颡鱼消化道中分离的50 菌药物以适宜溶媒溶解后，再用灭菌生理盐水分别稀 个菌株的MIC分别为0．78～6．25微克 ／毫升，从连续 释至 1000．0毫克 ／升的浓度。然后在无菌条件下，用 投喂5天烟酸诺氟沙星药物饵料后的黄颡鱼消化道中 灭菌后的脑心浸液培养基将药物稀释 10倍，从而使 分离的150个菌株 ，其MIC上升至3．13~50．0微克 ／ 培养基中药物的浓度达到 100．0毫克 ／升的浓度 。再 毫升。对属于同一类的恩诺沙星，对照组黄颡鱼消化 用定量移液枪向每支盛有2．9毫升BHI培养基的试管 道 中分离 的50个 菌株 的MIC为0．39～12．5微克 ／毫 中加入2．9毫升含有药物的培养基，将试管在混悬器 升，而对从试验组黄颡鱼消化道 中分离的150个菌株 上混合均匀后，从中吸取2．9毫升含有药物的BHI培 的MIC上升 1．56~50．0微克 ／毫升 。硫酸新霉素、盐 养基加到下一试管中，以此类推制作成药物浓度分别 酸多西环素和恩诺沙星3种抗菌药物，无论是对从试 为 100．0毫克 ／升、50．0毫克／升 、25．0毫克 ／升…… 验组还是对照组黄颡鱼消化道中分离菌株的MIC均没 0．025毫克／升的2倍稀释药物系列培养基试管。最 有明显变化。 表 1 用药前后黄颡鱼消化道中细菌对各种抗菌药物最小抑菌浓度 (…c)变化 药物种类 组别 最小抑菌浓度