实训五 培养基的制备与灭菌.ppt

微生物与发酵工艺 实训五 培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1.学会一般培养基的制备原理、方法。 2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。 二、实验原理 二、实验原理 不同微生物对营养物质的要求各不相同。因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。 培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌培养基中性偏碱，放线菌培养基偏碱，霉菌、酵母菌培养基偏酸。 二、实验原理 根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体培养基相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入1.5～2.0％的琼脂，半固体培养基加入0.3～0.5％琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。 三、实验材料和用具 四、实验方法 四、实验方法 (6)灭菌高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。 3.高氏1号(W/V)(培养放线菌用) 可溶性淀粉 2.0g FeSO4 0.001g K2HP04 0.05g 琼脂 2.0g MgS04·7H20 0.05g 蒸馏水 100mL KNO3 0.1g pH 7.6-7.8 NaCl 0.05g （二）培养基制作注意事项 4.分装培养塞时，注意不得使培养基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起杂菌污染。 5.培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成分，培养基灭菌后，必须放在37oC温箱培育24h．无菌生长方可使用。 （三）棉塞制作 （四）灭菌 ②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。 ③打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5～10min，关闭放气阀。 （五）实验步骤 六、实验报告 * * 培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢活动。 二、实验原理 1.材料 马铃薯、蔗糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、K2HP04、MgS04·7H2O、FeS04·7H20、NaOH、HCl。 2.用具 试管、三角烧瓶、漏斗、量筒、吸管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、pH试纸、铁架台、漏斗架、止水夹、电炉、台秤、硫酸纸、药匙、牛皮纸、线绳、标签纸、剪刀、解剖刀、镊子、白瓷盘、(比色盘)铁丝筐。 1.培养基的制作方法 (1)称量 按照培养基的配方，准确称取各成分于烧杯中。 (2)溶解、加热 向上述烧杯中加入所需要水量，搅动，然后加热使其溶解。用马铃薯、豆芽等配制的培养基，须先将马铃薯或豆芽按其配方的浓度加热煮沸0.5h (马铃薯须先削皮)并用纱布过滤，然后加入其他成分继续加热使其溶化，补足水量，如果配方中含有淀粉，则需先将淀粉加热煮融，再加人其他药品，并补足水量。 (3)调节pH值 初制备好的培养基往往不能符合所要求的pH值，故需用酸度计，pH试纸或用氢离子浓度比色计来矫正，用0.1mol/L NaOH或lmol/L HCl调至合适的范围。 (4)过滤 用滤纸或双层纱布(中间夹一层脱脂棉花)趁热过滤。 (5)分装 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管或三角烧瓶内，管(瓶)口塞上棉塞(或硅胶泡沫塞)，用牛皮纸包扎管(瓶)口。 四、实验方法 培养基的分装 ①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 ②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。 ③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜，灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。 四、实验方法 斜面的摆法 （一）根据配制培养基的步骤,按下列培养基配方配制培养基。 1.肉膏蛋白培养基(W/V)(培养细菌用) 牛肉膏 0.3g 琼脂 2.0g 蛋白胨 1.0g 蒸馏水 100ML NaCl 0.5g pH 7.