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蟾毒灵体内外抗肿瘤作用及制剂研究进展 　　[摘要] 蟾毒灵是中药蟾酥中的一种活性单体，能抑制多种实体瘤及白血病肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细胞耐药，抑制肿瘤细胞迁移和浸润。该文就蟾毒灵对肝癌、肺癌、肠癌、胃癌、膀胱癌等多种肿瘤的体内外抑制作用及机制的最新研究成果进行了详尽综述，并综括了其新型制剂的研究进展，以期为其更深入的研究和应用提供参考。 　　[关键词] 蟾毒灵；抗肿瘤；体外；体内；制剂 　　[收稿日期] 2014-02-12 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；江苏省高校自然科学研究面上项目（12KJB350002）；江苏大学高级人才科研启动基金（11JDG122） 　　[通信作者] 许颖，讲师，博士，Tel：（0511E-mail：xying@mail.ujs.edu.cn 　　蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider的耳后腺或皮肤腺分泌的白色浆液经加工干燥而成的固体物[1]，具有解毒、止痛、开窍醒神之功能[2]，用于痈疽疔疮、咽喉肿痛、中暑神昏、腹痛吐泻等，临床使用历史悠久[3]。蟾酥中化学成分复杂，蟾毒灵（bufalin）是蟾酥中抗肿瘤作用最强的蟾酥二烯酸内酯之一，较蟾蜍毒素中其他单体而言，蟾毒灵的抗肿瘤作用更强而副作用却相对较低[4]。蟾毒灵分子式C24H34O4，相对分子质量386. 5，熔点238～244 ℃，难溶于水。蟾毒灵具有抗肿瘤、强心、升压、兴奋呼吸、抗炎、增强免疫力及局麻等生理活性。但由于其与蟾蜍二烯羟酸内酯及地高辛具有相似的结构，导致其高剂量时会产生心律失常、呼吸困难、昏迷等毒性[5]。 　　蟾毒灵对多种实体瘤及白血病肿瘤细胞表现出强烈的抑制作用，具有不容忽视的诱导肿瘤分化和凋亡作用。目前临床应用的蟾酥类抗肿瘤产品有蟾酥注射液、华蟾素注射液等，但尚未有蟾毒灵单体制剂。由于其卓越的抗癌效果，蟾毒灵得到了越来越多的关注，其制剂研究，特别是新型纳米给药系统报道日渐增多。本文对近几年来蟾毒灵对肝癌、前列腺癌、肺癌等各种实体瘤及白血病肿瘤的体外抗癌作用、荷瘤动物体内抗肿瘤效果及其新型制剂的最新研究进展进行了详尽的综述，以期能为其更深入的研究和应用提供参考。 　　1 蟾毒灵体外抗肿瘤作用 　　1.1 肝肿瘤 蟾毒灵在抑制肝癌细胞增殖方面取得了令人瞩目的效果。蟾毒灵显示出比多激酶靶向抑制剂索拉菲尼更强的肝肿瘤细胞抑制效果，Cao等[6]考察了蟾毒灵及索拉菲尼对人肝癌PLC/PRF/5及HepG2细胞的抑制作用，结果表明蟾毒灵对肝癌细胞的抑制作用大大超过了索拉菲尼。索拉菲尼对PLC/PRF/5及HepG2细胞增殖抑制的IC50分别为3 565.7，5 719.21 nmol?L-1；而蟾毒灵对PLC/PRF/5及HepG2细胞增殖抑制的IC50仅为157.87，33.65 nmol?L-1，蟾毒灵与索拉菲尼联合使用，还可以通过下调ERK增强索拉菲尼的对肝肿瘤细胞的抑制效果。研究表明[7]，蟾毒灵能够下调肝肿瘤细胞HepG2细胞周期相关蛋白的表达，诱导HepG2细胞阻滞于G2/M期，抑制HepG2细胞的生长。蟾毒灵与华蟾素注射液中另外2个主要成分华蟾酥毒基、酯蟾毒配基相比，对肝肿瘤细胞SMMC-7721，BEL7402有更强的抑制作用，达到相同生长抑制效果所需浓度低于丝裂霉素[8]。Qi F等[9]研究表明蟾毒灵与华蟾酥毒基能通过Fas-及线粒体介导的途径诱导HepG2细胞凋亡，特别是Fas-介导的Caspase-10途径。最新研究表明，蟾毒灵可触发HepG2细胞自我吞噬机制，增强Beclin-1的表达及LC3-I向LC3-II转化，降低p62的表达以及mTOR信号的活化。蟾毒灵能够诱导HepG2细胞发生程序性细胞死亡（programmed cell death，PCD），尤其是自我吞噬，其发生的机制可能是AMPK-mTOR依赖性的[10]。Hsu等[11]考察了蟾毒灵对3种人肝癌细胞Huh7，Hep3B及HA22T的作用效果及机制，结果表明，蟾毒灵能通过增强JNK激酶通路诱导肝癌细胞自我吞噬，诱导THF，BECN-1，MAPK及ATG8上调，以及Bcl-2和Bid下调。 　　蟾毒灵在逆转肝癌细胞多药耐药方面也显示出卓越的效果。孟晓燕等[12]研究了蟾毒灵对人肝癌多药耐药BEL7402/5-FU细胞增殖的影响，采用流式细胞术检测1.00，0.10，0.01 μmol?L-1蟾毒灵作用24 h对细胞凋亡率及细胞周期的影响。BEL7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿霉素、长春新碱几种化疗药物均表现出不同程度的耐药性，而蟾毒灵对B