农杆菌介导的PSAG12-IPT基因转化柳枝稷研究.pdfVIP

第 22卷 第 6期 草 地 学 报 2014正 11月 Vol_22 No．6 ACTA AGRESTIA SINICA NOV． 2014 doi：10．11733／j．issn．1007—0435．2014．06．028 农杆菌介导的P G12-IPT基 因转化柳枝稷研究 柴乖强，徐开杰，王勇锋，孙风丽，刘曙东，奚亚军 (西北农林科技大学 农学院，陕西 杨凌 7121OO) 摘要 ：为延长生物能源作物柳枝稷 (Panicumvirgatum)的叶片功能期 ，以柳枝稷 西‘稷 1号 ’品系 的成熟胚诱导 的 愈伤组织为受体 ，采用农杆菌介导法转化叶片衰老延缓基 因PsAcz—JPT。结果表 明：经过农杆菌转化 ，共培养 ，抗 性愈伤组织筛选 、再生和生根培养 ，在农杆菌介导处理 的 8500块愈伤组织中共获得 了 320株转化植株 ；经 PCR检 测分析 ，转化植株 中共有 19株植株扩增 出标记基 因潮霉素 B磷酸转移酶基 因的 目标片段 ，初步表 明PsA。 一IPT 基 因已整合到柳枝稷基 因组 中，转化率为 0．223 。对柳枝稷转基 因植株 的叶片叶绿素含量、净光合速率、胞 间 COz浓度和气孔导度进行测定 ，表明PsAczJPT基因在部分转基 因植株 中已经表达 。 关键词 ：柳枝稷 ；PSAc 一JPT基 因；遗传转化 ；农杆菌 中图分类号 ：S36 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—0435(2014)06—133卜O6 Agrobacterium—mediatedTransformationofPSAGI2一IPT GeneinSwitchgrass CHAIGuai—qiang，XU Kai—jie，WANGYong—feng，SUN Feng—li，LIU Shou—dong，XIYa-jun (CollegeofAgronomy，NorthwestAFUniversity，Yangling，ShaanxiProvince712100，China) Abstract：Inordertoprolongthe1eaffunctionalperiodofbioenergycropswitchgrass，theleafsenescence geneP G12一PT wastransferred into switchgrassusingAgrobacterium—mediated transformationwith the embryogeniccallusfrom matureseedsasthematerials．Theresultsshowedthat320transgenicplantswere obtainedfrom 8500callusafteragrobacterium—mediated transformation，cocuhivation，screeningresistant callus，plantregenerationandrooting．PCR analysesoftransgenicplantsindicatedthatthetargetfragment ofHygromycin B phosphoricacid transferasegenewasamplified from 19plants． Itprelim inary showed thatthePsAG12一IPT genewasintegratedintothegenomeofswitchgrass，andthetransformationefficiency was0．223 ．Furtherresearchonthe1earchlorophyllcontent，netphotosyntheticrate，intercellularCO， concentrationandstomatalconductanceoftransgenicplantsshowedthatP融G12一PT genewasexpressedin someofthetransgenicplants． Keywor