荧光原位杂交技术的应用进展.pdfVIP

第 3O卷 哈尔滨师范大学 自然科学学报 第 6期 NATURALSCIENCESJOURNALOFHARBINNORMALUNIVERSITY 荧光原位杂交技术的应用进展 张 淼 ，陈 瑛 ，吴忆宁 ，陈兆波。 (1．哈尔滨师范大学；2．哈尔滨学院；3．哈尔滨工程大学) 【摘 要】从荧光原位杂交技术的实验方法和技术要点出发，介绍了最近几年 荧光原位杂交技术在环境微生物监测、医学诊断和分子生物学研究中的应用进展． 【关键词】荧光原位杂交；环境监测；医学诊断；基因定位 Nederlof等在 1990年创建了多色荧光原位杂交 0 引言 技术，提出用3种荧光素探测3种以上靶位DNA 荧光原位杂交技术 (fluorescenceinsituhy- 序列 ．时至今 日，已经发展出了可 以同时用 7 bridization，FISH)是一种出现于20世纪7O年代 种颜色的探针进行检测的多色荧光原位杂交方 末的非放射性分子遗传学实验技术．它根据碱基 法．目前荧光原位杂交技术因其安全、准确、方 互补配对原则，通过特殊手段使带有荧光物质的 便、实用等优点得到了广泛的关注及应用． 探针与 目标DNA接合，最后用荧光显微镜即可 直接观察 目标DNA所在的位置． 1微生物荧光原位杂交实验基本方法 原位杂交技术最早 由Pardue和 Gall、John于 1．1 实验操作方法 1969年建立…，他们将放射性标记的DNA与 目 (1)样 品采集 标DNA接合，通过放射 自显影技术来确定 目标 lO00r2min取上清．8000r3rain，留沉淀． 基因所在位置，首次做到了在细胞完整的条件下 (2)固定 检测细胞 内基因l11．但是存在灵敏度和分辨率不 加固定液 (4％多聚 甲醛)混匀后 8000r 能同时都满足的缺点，所以人们开始了改进探针 3min，留沉淀．加固定液混匀4~C过夜． 和杂交方法的探索．1981年，Boumam和Langer (3)制备载片 等首次采用荧光素标记的探针在细胞制片上进 将Gelatin与处理过的载玻片灭菌，然后将 行基因原位杂交，建立了非放射性原位杂交技 载玻片在Gelatin中反复浸泡3次风干备用． 术 J．1988年，Giovannoni将原位杂交技术引入 (4)细菌预处理 细菌学 的研 究，使用 rRNA探针显微探测细 蛋 白酶、溶菌酶处理．在处理过的载玻片上 菌 ．随着更安全 的荧光技术的发展，1989年 滴加 10 L样 品 自然干燥．梯度酒精 (50％， Delong首次使用荧光标记寡核苷酸探针检测单 80％，95％，100％)依次脱水，每～级停留5min． 个微生物细胞 J． (5)第一次杂交 20世纪90年代以后，荧光原位杂交技术新 取杂交液(甲酰胺、硫酸葡聚糖、NaC1、Tris— 的发展趋势是 由单色向多色发展．首先，Cremer cl、SDS、探针按一定比例}昆合)20 L滴加在细 等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素 (AFA)标记 菌风干的位置上(避光)．放入密封容器中，杂交 探针建立了双色荧光原位杂交技术 ．然后， 炉 46 3h． 收稿 日期：2014—08—03 第 6期 荧光原位杂交技术的应用进展 91