伪狂犬病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达.pdfVIP

猪的传染病 巴细胞百分比较高可能是由于ORF病毒非特异性影响，引起T和B细胞同种相互作用．持 续的体液免疫。这可能由于E2亚单位疫苗免疫猪这些细胞百分比较低的缘故【8J。 7猪瘟病毒致细胞病变和非致细胞病变原因 为确定猪瘟病毒最小需要量的自主鼢姐复制子．根据猪瘟病毒AIfb州187感染性cDNA 克隆，对结构蛋白和非结构蛋白的基因进行了框内缺失。RNA由各自的质粒体外转录，并 转染SK．6细胞。通过免疫染色检测转染细胞转染后不同时间表达Ns3蛋白检测复制RNA 要的，但每一种重组病毒的复制效率变化很大。包含完整的Ns2．Ns3基因的RNA复制子持 续在转染细胞中存在，继续复制并不引起明显的细胞形态学和功能损伤，然而基因组缺少 Ns2基因会导致复制效率更有效和诱导致细胞病变效应。这些发现表明NS2虽然对瘟病毒 RNA复制不是必要的，但有一种调节功能“． 对于猪瘟病毒三株独立的致细胞病变分离株，在感染细胞中发现的是缺损RNA而不是 全长的病毒基因组。这些RNA代表了典型的缺陷干扰颗粒。因为辅助病毒的复制是独立的 并且辅助病毒的复制干扰这些砌她的复制。分析DI基因组发现内部缺失了4，764个核苷酸。 这些核苷酸环绕着病毒的全部结构蛋白的编码区和两个结构蛋白的侧面。Plaque分离和 RNA转染实验显示这些猪瘟病毒分离株的细胞病变效应是由DI颗粒引起的。 8展望 彻底揭示猪瘟病毒的致病机理，对于防治和控制猪瘟病毒具有重要的科学意义，同时对 于其它病毒的研究也会提供重要的研究基础。但我们应看到，在猪瘟病毒致病机理方面仍有 很多未知领域需要深入的研究。 参考文献略 伪狂犬病毒Ea株ULl8基因的克隆、序列分析及表达11 薛惫波肖少波江云波金黎亮常天明陈炔春方六荣’ (华中农业大学农业微生物孝国家重点实验室．华中农业大学动物医学院动物病毒室，湖北省武汉市 430070) 摘要，本研究以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板，通过PcR扩增含uLl8奎长基因，将PcR产物 十氨基酸．将谊基因亚克隆到原梧表达载体pQE一82L的6xHis下辨，获得原核表达质粗pQE．82L．uLl8， 、№吼啊I-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抚发生特异性反应．进一步蒋uLl8基因插入真括 细胞，通过激光共聚焦显微镜观察发现转染后24h融合蛋白EGFP．uLl8主要定位在细胞泉，仅有部分定位 于细胞核，而4孙剧主要定位在细胞棱．奉研究为进一步研究伪狂犬病毒uLl8基因的结构和功能奠定了 基础． 关键词z伪狂犬病毒；ULl8基因；序列分析：表选 伪狂犬病毒(P∞udorabiesv．吣．PRv)可引起多种家畜和野生动物的伪狂犬病，尤其是 猪伪狂犬病，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，是一种具有重要经济意义的动物病毒性 传染病。我国自1948年首次报道此病以来，目前已有20多个省市发生和流行此病，严重阻 碍了我国养猪业的健康发展和对外贸易。 基金项目：国家自然科学基盎 cn 中晷蠢牧善医学会动揍传纂癀学分舍第十二次学术研讨会 疱疹病毒科m疱疹病毒亚科，基因组全长约150kb，o卜c含量高达73％．可编码70．100种 蛋白”捌，核酸蛋白的乡}面是袤壳，是由162个壳粒组成的一个等二十舀面体。目前，PRv 衣壳的结构和组成都是从Hsv_l病毒粒子的研究中推测出来的。PRv的衣壳为二十面体结 构(包括150个六邻体和12个五邻体)，其中六邻体含有6个ULl9分子和6个uL35分子． 形成衣壳边缘和表面；12个五邻体形成表壳顶角，其中11个五邻体是ULl9的五聚物，第 12个顶角是由12个uL6分子形成的圆柱形结构．该结构仅允许一个拷贝的病毒DNA基因 组装配进衣壳。衣壳在缨胞拔申装配，需要六种成熟衣壳能组成蛋白(t危38、uL35、uL25、 不存在于成熟的衣壳中Ⅲ。毫无疑问．对衣壳蛋白ULl8的研究和分析可以认识PRv衣壳的 形成，包装，从整体上完善PRV基因组结构与功能具有重要意义。 本研究以国内地方分离的PRvEa株为材料。对ULl8基因进行了克隆与序列分析。并 在大肠杆菌中实现了高效表达。同时构建了uLls与EGFP的融合表达质粒。在体外转染细 胞中分析了uLl8的定位模式，为进一步研究该基因的结构与功能