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毛状根培养的工业化研究进展宰 张*，王少丽，刘晓蛔 (中因矿业大学生物工程系，江苏待州221000) 擒要近三十年来利用毛状根生产植物次生代谢产物的研究不断增加。但毛状根工业化生产还受到限制，其主要原 因是对毛状根合成次生代谢产物的影响机制了解得还不细致．讨论了物理、化学因素对毛状根生长和次生代谢产物 合成的影响机制，提高毛状根合成代谢物产量的调控技术．以及生物反应嚣中关键影响因素的研究进展．虽然借助 于代谢工程将使得毛状根大量表达次生代谢产物成为可能，但由于毛状根的形态和生理特性，深入研究相应的反应 器并提高传质效率将为工业化培养毛状根提供可靠依据。 关键词发根农杆菌；毛状根；次生代谢产物：物理化学因素；生物反应器 植物作为天然药物，香料、色素，以及农药和工业原料等重要来源，是工业生产中不可或缺的资源。然而随着 天然植物资源的不断匮乏，采用何种方式获得这类植物次生代谢产物已经成为需要迫切解决的问题。从化学合成的 方法考虑，要获得这些化合物较为复杂，工艺水平难以达到商业生产的要求，且成本巨大．因此，80年代以来采用 生物技术生产植物次生代谢产物已日益成为关注的热点。 利用生物技术生产植物次生代谢产物主要有两种方式：植物细胞培养。植物器官培养．制约植物细胞生产次生 代谢产物的主要瓶颈在于大多培养出的是未分化细胞“1．结果次生代谢产物的台成途径不完整．因此使得次生代谢产 物的合成能力低且不稳定，造成产业化的进程缓慢。而器官培养可以克服这种缺点，尤其是用发根农杆菌转化植物 root)能获得较稳定的培养系。与天然植物根相比，毛状根具有激素白养、生长迅速、周期 细胞形成的毛状根0lairy 短等特点；同时由于它是分化程度很高的器官培养物。代谢通路能够比较完整地表达，尤其是一些特殊的次生代谢 产物的高效合成较为稳定．为大量生产提供了有用的手段脚． 目前对发根农杆菌感染植物诱导毛状根的产生已有较多的报道．转化成功的植物有200多种，其中太多数为双子 叶植物，隶属30属植物，已报道表明毛状根转化成功与否与菌株的种类、外植体的材料来源、生理状态，感染时问、 预培养和共培养时间、活化因子的使用以及所使用的抗生素种类和浓度等因子关系密切删。虽然转化成功的毛状根 报道较多，但如何使其工业化生产有用的次生代谢产物则报道较少．表明其尚需深入研究．本文主要探讨了植物毛 状根朝向工业化的研究进展． 1 促进毛状根生长及其次生代谢产物合成的理化因素 要评价毛状根工业化生产的技术，经济可行性，首先需要了解毛状根的特性和营养需求．采用毛状根合成次生 代谢产物的前提应当是获得稳定的高产量毛状根培养体系。对于稳定的毛状根培养体系．虽然合成次生代谢产物主 要是由其遗传性所抉定的，但根据已有的植物细胞培养研究思路．毛状根生长速率及其次生代谢产物合成能力也受 物理因素和化学因素的影响。因此，对于一个新型植物毛状根培养系统，理化因素的影响是首先需要考察的内容． 研究的目标是提高次生代谢产物的量。 1．1化学因素 培养基的化学组成对毛状根及其次生代谢产物合成有较大影响，这方面的报道较多，研究重点主要集中在碳源、 氨源、溶解氧、外源激素、培养基中其它元素等方面． 首先，作为供应毛状根碳源的糖类较多，尽管研究者采用不同的单糖对相应植物毛状根生长和次生代谢产物合 成的影响进行了研究嘲，但对不同的单糖、双糖如何影响毛状根生长及其产物合成了解较少．深入弄清毛状根代谢糖 类机制有助于采取有效方法促进毛状根生长、提高次生代谢产物的台成效率。Bhagyalakshmi采用甜菜毛状根为模型， 对不同的单糖和双糖利用状况及其甜菜色苷合成进行了研究嘲。在所选用的糖中，蔗糖能够快速被利用，其次为麦芽 糖；葡萄糖只能被有限地利用；果糖、乳糖、半乳糖、木糖、甘油既能抑制毛状根生长，也能抑制甜菜色苷合成． 在反复采用相同碳源条件下，麦芽糖、葡萄糖不能被适应吸收。甘油只能在低量蔗糖存在的条件下，才可被消耗以 促进毛状根的生长，但不能促进甜菜色苷的合成。果糖可造成培养液渗透压的增加。其原因是由于毛状根分泌某些 化合物。从已报道的结果看if-91．蔗糖是最好的碳源，在植物吸收时可以水解为葡萄糖和果糖，但是蔗糖的利用速率 项目基金l中国矿业大学科学基金项[|(A0112) 作者简舟I张兴0964-)，男．副教授．主要从事生化工程、细胞工程等教学科研工作t 随着植物种类而不同。尽管增加初始蔗糖浓度对毛状根生长以及次生代谢产物合成的