六种固定液对冰冻切片苏木精-伊红染色效果的比较.pdfVIP

解剖学研究2012年第 34卷第 2期 AnatRes，2012，Vo1．34，No．2 159 · 技 术 方 法 · 六种固定液对冰冻切片苏木精一伊红染色效果的比较 梁艳清 (广东医学院组织学与胚胎学教研室，湛江524023) 让冰冻切片的苏木精一伊红 (HE)染色效果等同于石蜡 浸入小盒中．接着把装有组织块的小盒轻轻放在干冰制冷 切片，固定液的选择是最关键 。目前很多相关文献报道说 后的丙酮液面上 ．待包埋剂发 白后可放置低温冰箱内保存 法不一。我们选用组织学常用和易配制的6种固定液进行 一 段时间，之后放入恒冷切片机里以8Ixm厚度切片。分 苏木精一伊红(HE)染色效果的比较观察。 两大组 ，一组是切片完立即放人 6种 4~C固定液固定 1分 钟．另一组是切片用电吹风机冷风档风吹干后再行固定液 1 材料与方法 固定。之后 ，所有切片放人预热 37℃Maryer苏木素染液 2 新鲜组织标本，主要有大鼠和小 鼠的脊髓 、神经 、肝等 rain，返蓝 ，伊红染色 10S，梯度酒精脱水 ，二 甲苯透明，中 器官组织。德国LeicaCM1900型恒冷切片机 ，一次性莱卡刀 性树胶封片，显微镜观察结果。 片，立式染色缸和染色架若干。 2 结 果 1．1 固定液 有6种：①4％多聚甲醛；②甲醇；③改 良AF液 …： 4％多聚甲醛固定的冰冻切片中组织结构清晰 ．细胞核 95％乙醇 150mL和 40％甲醛 5mL：④AAF液_2]：95％乙醇 形态基本正常 ，细胞核和胞质着色鲜艳 ：甲醇固定的切片 85mL、40％甲醛 10mL、冰醋酸 5mL：⑤AFA液E31：95％乙 组织结构一般 ，细胞核形态基本正常 ，细胞核和胞质着色 醇 95mL、40％甲醛 5mL、冰醋酸 1mL(用前加入)；⑥混 清晰 ：改良AF液和AAF液固定 的切片组织结构一般 。细 合液…：丙酮 85mL、40％甲醛 10mL、冰醋酸 5mL。 胞核形态基本正常，细胞胞质着色都较淡 ：AFA液固定的 1．2 方 法 切片组织结构不清晰，细胞核和胞质着色较淡 ；混合液 固 先用锡纸特制小盒装有 OCT包埋剂 ，将新鲜组织标本 定的片子的HE染色效果最差，组织肿胀 明显，细胞核有少 表 1 6种固定液对冰冻切片 HE染色效果的比较 许变形 (表 1)。 好，组织收缩较小；4％多聚甲醛一般配制为pH7．2中性，能 减少组织的酸化，有利于细胞着色。4％多聚甲醛相对较好保 3 讨 论 存组织切片的细胞形态和结构，细胞核和胞质染色鲜艳 。 组织材料浸泡在化学试剂中。借助化学试剂的作用把细 ②甲醇有收缩固定的作用，能基本抵消细胞内液经冰冻后体 胞形态结构保存起来．不使其改变形态和变质的一种手段 。 积稍微膨胀。但固定后结构还是不能较好保存与石蜡切片细 这种化学试剂称为固定剂。组织切片经过固定液能把蛋白 胞形态上一致。③改良AF液中以95％乙醇为主，乙醇可沉 质、酶、糖等沉淀或凝固成不溶性物质 ，保持组织细胞与正常 淀白蛋白、球蛋白、核蛋 白，但核蛋白被沉淀后仍溶解于水 ， 的生活时的形态相似。选择最佳的固定液能缩小显微镜下冰 对细胞核着色不 良，且很快在组织表面形成一层蛋白膜 ．阻 冻切片和石蜡切片在组织