食品科学与工程毕业设计（论文）-绿茶中蛋白质及黄酮的抗氧化性初步研究.doc

毕 业 论 文 题 目: 绿茶中蛋白质及黄酮的抗氧化性初步研究 学院(直属系): 生物工程学院 年级、专业: 2008级食品科学与工程 学 生 姓 名: 学 号: 指 导 教 师: 完 成 时 间: 2012年5月17日 目 录 摘 要 2 Abstract 3 1 前言 4 1.1茶叶的主要功效 4 1.2茶叶内所含成分及其保健功效 6 1.3绿茶中抗氧化性蛋白质以及黄酮在食品中的应用 7 1.4绿茶中抗氧化性蛋白质以及黄酮在药品中的应用 8 1.5邻苯三酚自氧化法 8 1.6绿茶中抗氧化蛋白与黄酮的研究展望 8 2材料和方法 9 2.1 材料和仪器 9 2.2 实验方法 9 3 结果与讨论 12 3.1蛋白质的提取与分离 12 3.2 抗氧化性结果分析 13 4 结论与讨论 36 4.1 结论 36 4.2 讨论 36 总结与体会 38 致谢词 39 参考文献 40 2材料和方法 2.1 材料和仪器 2.1.1 原材料 绿茶：蒙山炒青（品名），四川省茗山茶业有限公司，市售。 2.1.2 试剂 硫酸铵：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 95%乙醇：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 磷酸盐缓冲液（干粉包）：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 碳酸氢钠：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 焦性没食子酸（邻苯三酚）：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 三羟甲基氨基甲烷（Tris碱）：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 盐酸：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 抗坏血酸：分析纯，成都市科龙化工试剂厂 2.1.3 仪器 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9075A型 上海一恒科技有限公司 电子天平 TWX型 北京赛罗利斯天平有限公司 万用电炉 DL-1型 北京中兴伟业仪器有限公司 高速冷冻离心机 Centrifuge 5810R型 德国Eppendorf公司 恒温水浴锅 HH-2型 常州国华电器有限公司 磁力搅拌器 85-2C型 郑州市亚荣仪器有限公司 酸度计 pHS-3C 成都世纪方舟科技有限公司 紫外可见分光光度计 UV-2100型 北京瑞利分析仪器公司 2.2 实验方法 2.2.1 蛋白质以及黄酮的提取和纯化 2.2.1.1 蛋白质提取分离工艺流程 绿茶→浸提→过滤→离心→上清液盐析→离心→上清液盐析→离心→沉淀透析 ↓ ↓ 沉淀→透析→待测样品1 待测样品2 2.2.1.2 浸提液的制备 准确称取50.00g绿茶，按绿茶(g)：磷酸盐缓冲液(ml)=1：10比例加入500ml磷酸盐缓冲液，充分搅拌后于4℃冰箱中静置过夜。 取出后先将混合液用纱布过滤，然后把过滤夜置于离心管，等质量对称放置在冷冻离心机，以4℃，8000r/min速度离心20min，取得上清液350ml。 2.2.1.3 盐析及透析脱盐 查阅硫酸铵饱和浓度常用表，可知每100mL溶液配成40%饱和度溶液需加固体硫酸铵22.6g。因此准确称取79.1g硫酸铵粉末，将制得的上清液置于500ml烧杯，将烧杯放在磁力搅拌器上，一边搅拌，一边在冰水浴中缓慢加入已经称好的硫酸铵粉末，控制好加入的速度，从而制成40%饱和度的硫酸铵溶液。等硫酸铵充分溶解后，将溶液置于4℃冰箱静置过夜。 将上述溶液取出倒入离心管，注意等质量对称的放置在冷冻离心机中，以4℃，8000r/min速度离心20min，取得上清液330ml，下层沉淀为在40%(NH4)2SO4离子浓度下析出的蛋白质。通过查阅硫酸铵饱和浓度常用表，每100mL溶液从40%饱和度配置成80%饱和度溶液需加固体硫酸铵25.8g。准确称取77.4g硫酸铵粉末。将上清液置于500mL烧杯，在磁力搅拌器上，一边搅拌，一边在冰水浴中缓慢加入已经称好的硫酸铵粉末注意加入的速度从而制成80%饱和度的硫酸铵溶液。待硫酸铵充分溶解后，将溶液置于4℃冰箱静置过夜。然后将在40%(NH4)2SO4离子浓度下析出的蛋白质溶解于pH=6.8