卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒构建与表达.pdfVIP

4464 · 现代预防医学2008年第 35卷第 22期 ModernPreventiveMedi i·ne，2008，Vo1．35，NO．22 文章编号：1003—8507 2008 22—4464一o4 中图分类号：R382．3 文献标识码：A 【实验技术及其应用】 卡氏Jj市子包子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒 构建与表达 段义农，董永生，朱丹丹，王建新，陈金铃，秦永伟 摘要： 『目的 ]构建大 鼠源卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒，进行表达。 [方法 ]以卡氏肺孢子 虫DNA为横板 ．应用PCR扩增MSG基 因片段，连接至pGEM-TEasy载体，再克隆至PCDNA3．1 + 载体 构建的重 组表达质粒经酶切、PCR鉴定后转染至COS一7细胞，并进行大量增殖。RT—PCR验证转染基 因的表达。 [结果 ]重组 表达质粒 PCDNA3．1 + ／MSG经酶切及 PCR鉴定结果表明构建成功 。RT—PCR结果显示MSG基 因片段成功转染至 COS一7细胞 ．并在其 中进行基 因表达。 f结论 ]成功构建 了PCDNA3．1 + ／MSG重组质粒，并在COS,7细胞 中表 达 ．为进一步进行核酸疫苗的研究打下基础。 关键词 ：卡氏肺孢子虫；MSG抗原 ；真核表达 CoNSTRUCTloN AND EXPRESSION oF EUKARYoTIC EXPRESsION PLASMII S OF PNEU— MOCYSTISCARINIIMSG ANTIGEN GENE FRAGMENT DUAN Yi-nong，DONG Yong-$kng， ZHUDan—dan，et以 DepartmentofParasitology，SchoolofMedicine，NnatongUniveity，Nantong 226O01．China Abstract： [Objective]Toeonstmcteukaryoticexpressio‘nplasmidsofPneumocystiscarinii PC MSGantigengene ~agment，andproceedonexpression．[Methods]ThePCMSGantigengenefragmentwasamplifiedfrom lungtissueofrats infectedbyPC andclonedintopGEM-T Easyvector．Afteridentification，thefragmentwasinsertedintoeukaryoficexpressio‘n vector，andclonedtoPCDNA3．1 + carrier．TherecombinantplasmidwasscreenedandidentifiedbyPCR andrestriction analysistotransfecttoCOS-7cell，andgreatlyproliferation．TheRT-PCRverifiedtheexpressionoftmnsfectiongene． 【Re‘ suits]TherecombinantplasmidPCDNA3．1 + ／MSGwasconstructedsuccessfullybytheverificationofPCRandrestriction na alysis．Th eresultofRT-PCR．confirmedthattheMSG genefragmentwastransfectedinot COS-7cells，andthegenewasex— pressedintotheceHs．[Conclusion]ConstructionandexpressionofeukarvoticexpressionplasmidPCDNA3．1 + ／MSGhas beenconstructedsuccessfullynadexpressedinCOS-7ceils，thisstudyprovidesbasisforthefurthergeneengineeringvaccine study． Keywords：Pneumocystiscarinii；MSGantigen；Eukaryoticexpression 氏肺孢 子虫 Pneumocystiscarinii，PC 是一种机会 感 l 材料与方法 染性病原体 ，在免疫功能不全患者 ，PC可以引起卡氏肺孢子 1．1 材料 虫肺炎 Pneumocvstiscariniipneumonia．PCP ．由于 PCP是 1．1．1 动物模型、载体及细胞 根据本实验室建立的方法 给 先天性或后天性免疫功能低下患者如艾滋病