猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟及凋亡的关系.pdfVIP

第十二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟及凋亡的关系 文国艺陈自洪挛日聪石德顺 (广西大学动物科技学院，南宁，530005) 摘要本研究就猪卵泡液对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行7探索：试验一证明，体外培养46 —48h时，成熟液添加5％猪卵泡液能促进成熟，核成熟率为41．2％，成熟液添加20％猪卵泡液则抑 制成熟．核成熟率为23．1％，二者差异显著；试验二证明，添加猪卵泡液可以促进猪卵母细胞体外存活 时间的延长．体外培养第16天，含0％、5％、10％猪卵泡液的存活率分别为26％、22．2％、18．6％，添 加与否差异显著。 关键词猪，卵母细胞，卵泡液，体外成熟，存活率 随着现代胚胎工程技术的不断发展，人们对 的哺乳动物相比，猪卵母细胞的体外成熟率不够 马、牛、羊、猪等动物卵母细胞体外成熟的研究在 理想，原因是多方面的，有些难题如猪卵母细胞 不断地深入．获得具有较强发育能力的卵母细胞 核质成熟的不同步，目前仍然没有找到很好的解 是各种后续相关胚胎工程技术的前提和关键点。 决方法。猪卵泡液是影响猪体9}成熟的重要因 如体外受精、性别控制、克隆及转基因等等，都箭 素之一，但其作用机理和效果一直没有定论(1、 要良好的卵母细胞体外成熟手段作为技术平台。 2)。 近年来。因为猪的内脏器官的大小与人类相似、 1试验材料与方法 一 取材容易、不太会引起伦理道德争议、疾病与人 1．1猪卵母细胞的收集 类差异大等诸多优点，引起了世界生物医学领域 试验所用猪卵巢均来自南宁郊区屠宰场当 前所未有的重视．猪将成为人类未来最可能的器 日凌晨屠宰的本地母猪，预先将一定体积与生理 官来源，缓解甚至从根本上解决人类移植器官短 盐水等渗的PBS液。根据当日气温加热到适宜 缺的问题，即便现在器官捐赠工作良好的美国， 温度。装入保温瓶后提前一定时间交到卵巢收集 每年需要器官移植的人多达78，000人以上，而者手中，在屠宰后2h内取回卵巢，由于猪卵母细 能获得器官移植的人不足22．000人．平均每一胞对温度特别敏感，实验室取出卵巢时的温度以 天有16人死于器官供应不足，因此．对猪的研究 32～35C为宜，卵巢用消毒加热的PBS液洗涤 逐渐成为热点和新的经济增长点，许多上市公司 两次。然后按常规方法抽取卵母细胞，选取细胞 投巨资进行猪的研究。但是，至今为止，与其他 质均匀的卵母细胞，置于含3％发情母牛血清的 作者简介：文国艺(1966一一)，男(汉)。湖南来阳人，副研究员，硕士(博士生课题)(武汉大学细胞生理学研究生毕业， 英国剑桥丈学访同学者，主要从事动物完全俸外和俸细胞克隆研究(国家863项目)．曾获广西科技进步一等奖，国家 一126— 第-t-二届全国动物繁殖学术讨论会{g-文集 TCM一199液中洗涤2次后备用(3)。 养液的四个培养皿中，分别含O％、5％、10％、 1．2卵泡液的制备 20％猪卵泡液，另加少量卵泡颗粒细胞进行协同 在通常的完全体外化过程中，抽取卵母细胞 培养，将平皿放入气相为5％C。2的空气、温度 时在注射器中先吸一些培养液。以便使卵母细胞 为39℃、相对饱和湿度的培养箱中，进行静态体 离体后立刻就有一定的营养成分补充．但在制备 外同步成熟培养，培养46—48h时进行成熟观 卵泡液时，抽取卵母细胞时决不能加入培养液， 察，以有清晰第一极体的作为核成熟指标。试验 因为会改变卵泡滚的成份及正常比例。将挑选 2将抽取后的卵母细胞随机分成三组，分别在含 卵母细胞后剩下的卵泡液倒入离心管，以 0％、5％、10％猪卵泡液的成熟液中连续培养，分