红壤中微生物总DNA的分离与纯化.pdfVIP

第 卷 第 期 井冈山学院学报(自然科学) 28 12 Vol.28No.12 年 月 2007 12 JournalofJinggangshanUniversity(NaturalSciences) Dec.2007 红壤中微生物总DNA的分离与纯化 朱立成,邹小明,蔡瑞玉,阙艳明 (井冈山大学 生命科学学院,江西 吉安 ) 343009 摘要 采用 种不同的土壤 直接提取方法,提取了 种不同类型红壤的微生物总 并对提取的 用 [ ] 2 DNA 4 DNA, DNA 离心层析法进行了纯化。结果表明:种方法都可以从红壤中提取到分子量大于 的 SephadexG-200 2 10kb DNA 的片段 不同提取方法获得的 的产量存在较大差异。方法二用冻融进行预处理再结合 和溶菌酶的化学 , DNA SDS 裂解方法,是效果较好的DNA抽提方法。其提取DNA产量高,重复性好,适合于土壤少量样品的DNA提取。 离心层析法能较好地去除土壤中的有机物杂质, 溶液由原来的黄褐色变得澄清透明,且不 SephadexG-200 DNA 会使提取的DNA断裂或损失,是一种较好的土壤微生物总DNA纯化方法。 关键词 土壤 提取; 纯化; [ ] DNA DNA SephadexG-200 中图分类号 文献标识码 文章编号 ( ) [ ]X172 [ ]A [ ]1673-4718 2007 12-0005-03 土壤是微生物栖居的主要场所,微生物在土壤 子量更大,纯度更高,但不可避免的,该法得到的 中的分布及生命活动与土壤肥力、植物营养、植物 DNA产率有所降低,操作费时,而且不能得到一些 病害和植被状况等密切相关。长期以来研究自然环 未培养或不能培养微生物的 。 , DNA 境中微生物群落的多样性一般是通过传统的纯培 由于人们普遍认为较高的DNA得率更能代表 养的方法进行。据估计, 土壤中含有 以上的 大部分的土壤微生物种群和遗传多样性,目前进行 1g 100 微生物,而在营养平板上能生长的只占其中的 基因文库构建时大多仍采用直接法提取土壤总 ,不能培养或未培养的部分大多是在实 。本研究采用 种不同的直接提取法对 种不 0.01%～15% DNA 2 4 验室条件下处于死亡或暂时处于代谢不活跃状态 同条件下红壤的微生物总DNA进行提取,并对提 的微生物[1] 取的 。随着分子生物学技术的发展, 指纹、