自身免疫性疾病患者血清BlyS抗BlyS及其特异性免疫复合物的测定研究.pdfVIP

生堡捡堕匿堂盘查!Q!!至!旦筮塑鲞筮!塑￡!也』!坐丛塑：垒!匹塾!!堕：!!!望：堕!：! B淋巴细胞刺激因子(Blys)是肿瘤坏死因子 (TNF)家族的新成员，由T淋巴细胞、单核细胞和树记的亲和素与兔抗人BlyS上的生物素结合，加底物 突状细胞等表达，其受体仅存在于B淋巴细胞上。 显色，读取吸光度(A)值。试验条件为：包被液[pH Blys在体液免疫中发挥重要调控作用，其正常表达9．6的0．05 7．4的0．01 不仅能保证脾脏生发中心的形成和B淋巴细胞的 (pH 正常发育，而且对次级免疫反应及记忆和成熟B细 释液及酶反应结合物稀释液均为10％新生小牛血 胞的存活都非常重要¨’2J。研究证实，B淋巴细胞在 滴定法摸索固相分子(mABlys)的最适包被浓度，并 用抗IgM预活化后，添加外源性Blys可诱导其大量 增殖并分泌各型免疫球蛋白，用BlyS转基因的小鼠用上述样本稀释液进行封闭，至可用于血清BlyS 可呈现出严重系统性红斑狼疮(SLE)症状。此外，测试。具体步骤如下：将1：2稀释的血清样本 100斗1分别加人包被好的微孔板内，37℃反应1h， 在类风湿关节炎(RA)和干燥综合征(ss)等自身免 洗涤3次，5 疫性疾病(AID)患者体内常伴有Blys的过量表达， RAHBlyS，每孔100¨l，37℃反应1h，洗涤后再分 据此推测BlyS与AID发生和发展可能有密切关 系∞’4o。为进～步研究Blys在AID中的作用，本研 色10min，终止反应后测A值，依据提供的Blys标 究建立了一系列用于检测B1ys、抗Blys(BlyS—Ab) 准品蛋白浓度绘制标准曲线，计算相关系数(r)，选 及其特异性免疫复合物(Blys—Ic)的酶联免疫吸附 择线性关系好，灵敏度高的试验条件。 试验(ELISA)，并对各类AID患者进行测定研究。 对象和方法 浓度为2．5¨g／ml的Blys包被聚苯乙烯反应板， 1．对象：所有患者血清均取自南京军区南京总 10％Ncs封闭，每孔加10％Ncs100恤l和待测血清 10斗l，37℃30 医院就诊者，其中：SLE26例，男2例，女24例，年 GAHIgG(在进行精密度和阻断抑制试验测定时，酶 龄8～57岁；混合性结缔组织病18例，男6例，女12 标记二抗为HRP一(强RIgG)，37℃20min，洗板，加底 例，年龄21—65岁；肾炎、肾病8例，男2例，女6 moL／L 物(TMB一过氧化脲)显色8min，用2 H2SO。 例，年龄18—47岁；RA 9例，男3例，女6例，年龄 Model550 终止反应。酶联仪(Bio—Rad 17—59岁；过敏性紫癜9例，男4例，女5例，年龄 MICROPIATE RADER)于450nm波长测A值，试验 6～23岁；多发性肌炎、皮肌炎、硬皮病和ss共7