基于SYBR+Green实时定量PCR法在抗汉坦病毒药物评价与筛选应用.pdfVIP

第三届佳染痘防控基础研究与应用技苤论坛 基于SYBRGreen实时定量PCR法在抗汉坦病毒药物评价与筛选 中的应用 卫飞 凌佳馨李宁 李金林陈良君熊海蓉罗凡刘媛媛杨占秋· 【摘要】目的建立一种体内外用于精确评价与筛选抗汉坦病毒药物的方法。 方法 以汉坦病毒S基因，哺乳动物和鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的 保守序列为靶序列，利用PrimerExpressv3．0软件设计三对实时定量PCR引 物，建立了汉坦病毒的SYBRGreen实时定量PCR检测方法，并将其应用到抗汉 坦病毒药物的评价与筛选中。结果将汉坦病毒，哺乳动物和鼠GAPDH靶基因连 接pGEM—T载体，构建重组质粒，经过梯度稀释后作为标准品，根据标准品稀释 度与Ct值的关系，获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线。结论该方法可 以用于体内外评价和筛选抗汉坦病毒药物，具有现实指导意义。 【关键词】汉坦病毒；qPCR；抗病毒药物；评价 ofSYBRGreen。’basedrealtime for Application