原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
实验7——茚三酮法测定氨基酸总量.ppt
实验七：茚三酮法测定氨基酸总量 1．实验原理 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。 2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。 试剂配制：讲义P32 （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。 （2）标准曲线的绘制及样品测定 4.结果计算 5. 注意事项 （1）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，最大吸收波长在440nm处。 （2）有颜色的样品必需经脱色处理至无色后方可使用。 氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤： 3. 实验步骤 （1）样品的处理：量取0.5mL酱油于50mL烧杯中，加入5g活性炭和40mL的蒸馏水，在电炉上加热至80℃左右，保持半小时后过滤至100mL容量瓶中，用蒸馏水将滤渣清洗数遍后转移容量瓶中，定容至刻度线备用。 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 茚三酮 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 磷酸盐缓冲液 0.6样品 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0 氨基酸标准溶液 1.0 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.6 水 7、8、9 6 5 4 3 2 1 各种试剂加到比色管后混匀，于水浴锅上沸水浴15min，取出冷却至室温后加水至10mL刻度线，静置15min后，在570nm处测定吸光值，以氨基酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。 单位：mL 氨基酸（μg/mL）= C×K V × 100 式中： C——从标准曲线上查得的氨基酸含量，μg K——稀释倍数 V——测定时取样量，mL
文档评论（0）