汉防己甲素对白血病细胞株U937逆转耐药机制的研究.pdfVIP

pHA MA EuT工巴AL口E日EA 巴H 药物研究 [： 工NA HEA L TH 工N口UB T日Y 汉防己甲素对自血病细胞株U937逆转耐药机制的 研究 武婕萍 胡慧萍 王 恺 张晋萍 山西省太原市省中西医结合医院，山西太原 030000 [摘要】不同浓度 Ara—c联合 TrD十预 U937细胞不同时间，高倍显微镜下观察细胞的形态变化，MTT比色法检洲细 胞的生长抑制作用，流式细胞术检测细胞周期。发现 1TrD可能通过将U937细胞阻滞于 S期而增强其对Ara—c的敏 感性 ．从而逆转耐药。 关【键词】汉防己甲素；阿糖胞苷；U937细胞；逆转耐药 中【图分类号】R733．7 文【献标识码】A 文【章编号】1672—5654(2012)04(b)一0041—02 白血病 耐药是导致死 亡的重要 原 (100~g／mL)，A3组 (1000txg／mL)；(2)联合 经不同干预组 处理后 于 6、12、24h3个 因之一 ．有效逆转 白血病耐药成为近年 组：Bl组(A1组+TTD)，B2组 (A2组+rrD)， 时点处各取 1OOtxL置于试管中， 试制 来的研究热点。1TrD为中药防己科千金 B组( 组+TFD)；(3)对照组(c组)不加 A液 (DNA—PREPLPR)100~L，轻 微振 藤属植物粉防己块根中一种生物碱 。现 药。按预定时间f6、12、24h)收细胞检测。 荡后 加 B 液 (DNA—PREFFM Stain) 认为 1TI’D是一多药耐药逆转剂 ，能提高 1．3检 测项 目及 方 法 500txL，混匀后室温放置20min，用流式 细胞内化疗药物浓度，达到逆转耐药的作 1-3．1形 态学观察 取 上述 3个 时间点 细胞仪检测。Multicycle软件进行细胞周 用，这一作用在耐药细胞 中尤 为明显I．-I。 (6、12、24h)收获的5xl0~mL细胞悬液 期分析。 我们应用MTT法 、流式细胞术研究 Ara--c 于倒置的显微镜下观察细胞形态变化 1．4统计学方法 联 合 TTD干 预 U937细 胞不 同时相 对 并取 每组 细胞各 500txL，离心弃液 ，涂 应用三 因素析 因设计方 差分析 及 其生长抑制与细胞周期阻滞 的影响 ，探 片 ，瑞氏一姬姆萨染色 ，光镜 (xl000倍)下 两两比较 SNK法 ，所有数据t~Spss11．0 讨 TTD对U937细胞逆转耐药的机制。 观察细胞形态。 软件处理 1材料与方法 1-3．2噻唑蓝法 (MTT)分析 取对数期 2结果 1．1主要试剂与药品 生长的细胞悬液 以5xlO~mL接种于 12 2．1细胞 出现凋亡形态 汉防 己甲素为浙江金华制药厂产 孔培养板中，经不同干预组处理 ，培养 A组处理 U937细胞 6h后可 见胞 品，将其溶于酸水 (pH=6)中，除菌过滤 。 6、12、24h后 ，将各组 以无血清培养液 膜皱缩，部分胞质内 现窄泡变性 ，l2}1 U937细胞购于中科 院上海细胞库 阿 悬浮于96孔培养板 中，每组设 3个复 为凋 亡高峰f60％1，町见细胞核染 色质 糖胞苷为PharmaciaItaliaS．P．A产 品．胎 孔 ，每孔 100txL，加 30txLMTF(5mg／mL)，4 凝集。核边集．细胞被分裂成数个质膜包 牛血清为州四季青产品，瑞士一姬姆萨液 小时后加 150gL二 甲基亚砜。微量振荡 裹的小体即凋亡小体。B组于24h达捌 为 BASO公司产品 ，M1Tr试剂 为 Sola卜 仪混匀后 ，自动酶标仪于 492nm处测定 亡高峰 bio公司产 品 DNA试剂盒为 Coulter公 吸光度(A)值 。根据公式 (A加药组一A 2．2抑制U937细胞的增生 司产品。 阴性组／