斑马鱼模型在药物毒性安全性评价中应用.pdfVIP

308 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 斑马鱼模型在药物毒性与安全性评价中的应用 朱俊靖1，陈汝家1，张勇1，辛艳飞2，宣尧仙2，李春启1 (1．杭州环特生物科技有限公司，浙江，杭州，311231；2．浙江省医学科学院安全}生评价研究中心) [摘要]斑马鱼模型既是重要的人类疾病模型，又是重要的药物毒性与安全性评价系统。利用该系统 在药物开发的早期阶段对不安全的化合物进行快速筛除，可以大大提高药物筛选的效率，缩短新药研 发周期，降低药物的研发成本，提高新药研发的成功率。杭州1环特生物科技有限公司已经成功地建立 了斑马鱼模型系统快速、准确、高效、低廉地鉴别、评价药物的心血管毒性、肝脏毒性、’肾脏毒性、 行为毒性和发育毒性与致畸性。 [关键词]斑马鱼；药物毒性与安全性评价；体内分析 目前国际上公认的药物毒性与安全性评估实验方法分为体外与体内实验两种。体外实验具有快速、高 效、经济等优点，但体外实验通常不涉及药物在体内的吸收、分布、代谢与排泄，因此相应的筛选结果与 整体动物试验结果可比性差。体内实验可提供可比性较高的筛选评估结果，但实验周期较长、成本高，不 适用于高通量筛选等因素又限制了该方法在药物毒性筛选领域的应用。斑马鱼模型用于新药筛选始于二二十 世纪九十年代，由于其快速、经济、预测性好、可比度高的特点，目前斑马鱼模式动物已被越来越多的药 物研发机构应用于药物毒性与安全性评价中¨。5J。 1斑马鱼药物毒性与安全性评价系统的优势 斑马鱼评价系统应用于药物筛选具有与生俱来的优势：①斑马鱼实验为整体动物研究，能反映化合物 吸收、分布、代谢与排泄的过程。而且，斑马鱼与人类基因组的相似度高达87％，有与人类近似的毒性特 征和信号传导通路，斑马鱼的各种器官和组织在解剖学、生理学和分子水平上已经被证实类似于哺乳动物， 是一种可比性较强的模式动物。②实验周期短，大部分实验能够在1天到1周内完成，而大鼠等哺乳动物 实验通常需要1个月以上的时间。③斑马鱼在受精后几天全身透明(图1)，可结合活体染料、荧光示踪、 抗体、核酸探针等方法同时观察化合物对多个器官的毒性反应。许多药物，特别是中药、天然药物须经体 内代谢后才表现生物活性，斑马鱼作为一种可同时、快速评价多种器官毒性的体内研究模型，在评价这类 药物毒性与安全性方面有其独到的优势。④斑马鱼体型小，不仅饲养成本低，而且药物用量少。斑马鱼实 mm，在96孔板单孔 验的用药量通常仅为啮齿类动物实验的1／100至1／1000。⑤斑马鱼幼鱼体长只有1-4 内可以放置5．7条，可以仅利用卵黄囊中营养存活7天，是目前唯一适合于微孔板高通量、高内涵、全自 动化分析的脊椎动物模型。⑥可以结合多种给药方式：一般来说，溶解在水环境中的小分子物质可以通过 斑马鱼皮肤和鳃直接吸收。斑马鱼在受精后72小时(hpf)可以吞咽，此阶段之后也可以通过口服给药；而 难溶于水的药物以及大分子类药物可以通过注射到卵黄囊、静脉窦或者循环系统的方式给药。成年斑至}鱼 可以通过口腔插管方式给药。⑦斑马鱼易于大量繁殖，单次产卵量高，一对斑马鱼每次可以产生100一；300 [通讯作者]李春启，现为杭州环特生物科技有限公司总裁、首席科学家；邮箱：jackli@zhunter．tom。 华东地区第十二届买验动物科学学术交流会 309 个受精卵，Ⅵ提供人晕单组蛮验样本，实验统训分析结粜n，信腹高 Q襞 图l斑马鱼在受精后6hpf，24hpf．120hpf的发育情况 受精后120h斑马鱼发育出独立的器官和组织 义具备整体动物实验可观察多个器宵、可评价曲放学及鲥动学、H坪价代谢物7^性等优谤。斑马臼模掣系 统胱L经J成功¨J于药物f『J发汀毒悱与致畸陀、心【m萑’毒性、旰毒陀、行为毒性和肾毒陛等一系列的评价实 转， 2发育毒-|生与致畸性评价 致畸性。Jil5r令主流的发育奇盹々致畸悱评价模掣j氇；足孕人鼠和妊娠兔子，似其评价周期长、操作复杂、 将斑屿鱼列为l桂 一种的评估环境污染物的动物模型，其一l-发育毒陛可作为最初的筛选步骤，并建立了斑 马鱼胚胎发育毒性的评价模型。在斑马鱼蹦、胎及幼鱼阶段，川t化台物分别处理