结核菌素用于猴结核病血清抗体检测及应用.pdfVIP

实验动物 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 结核菌素用于猴结核病血清抗体检测的应用 张钰，刘香梅，邝惠文，闵凡贵，王静，赵维波，黄韧 (广东省实验动物监测所，广东广州5100260) 【摘要】 目前非人灵长类感染结核病的活体检测方法只能提供结核菌素试验，检测方法的单一，给饲养和 管理带来很大的影响。该方法在非人灵长类结核病检测中的敏感性和特异性差也逐渐被人们所认识，研究新的结 核病检测方法一直是人们关注的重点。血清学检测方法是结核病检测的辅助手段之一，是结核菌素检测较好的补 充手段。它适用于饲养群体中，对结核菌素无反应的动物群体的检测。因此，我们将探讨血清学检测方法在非人 灵长类结核病感染中的应用。实验中我们利用结核菌素作为抗原，建立间接ELISA检测方法对3个实验猴饲养场 的402只动物进行检测，其中36只猴经细菌培养确认为结核病猴，366只猴经多次结核菌素检测阴性，确认为健 体检测的敏感性和特异性分别是91．7％和89．9％，再结合结核菌素实验结果将有利于对饲养猴群的结核病感染状 况进行综合评价。 【关键词】猴结核病：检测；间接ELISA；ROC曲线 结核病是非人灵长类易感的重要的人畜共患传染病，由于非人灵长类与人类有着相似的生理 结构，主要感染的分枝杆菌是彪tuberculosis，因此，非人灵长类的结核病一直是人们关注的重 点。每年各个饲养场都要进行两次结核菌素检测，在长期的实践中，饲养猴群结核病的检测方法 的单一，给饲养和管理带来很大的影响。VonLichtenberg¨报道了，猩猩对皮内结核菌素试验假 阳性较高，使结核菌素试验在新大陆猴的检测出现不可靠。其次，反复的皮内结核菌素试验使猴 对结核菌素出现耐受性，表现出无反应现象，增加了感染猴群分枝杆菌病源广泛传播的危险埋。。 已报道结核病的血清抗体检测适用于饲养场中对结核菌素试验无反应的动物群体的检测，是结核 菌素试验的较好的辅助检测手段，并应用于根除结核病饲养群体的研究中…’”。目前，血清抗体 的检测方法在我国非人灵长类结核病的检测中还未应用，因此，我们将探讨该方法在实验猴饲养 群体的结核病检测中的应用。 我们利用结核菌素作为抗原，建立问接ELISA的方法检测饲养猴群感染结核病的IgG抗体。 结核菌素已经商品化，获取容易，有利于检测方法的标准化。我们通过对不同来源 的结核菌素进行抗原性比较，结果来自北京生物所的旧型结核菌素(oT)作为抗原进行间 接ELISA检测的敏感性较高，应用受试者工作特征曲线(Roc)分析法，显示以结核菌素作为抗 原进行猴结核病血清抗体的间接ELISA检测方法具有实用价值，在临床诊断上结合结核菌素试验 结果有利于对饲养群体的结核病感染进行综合评价。 1 材料和方法 1．1 血清样品检测血清来自3个实验猴饲养场共402份血清，这些饲养场都有过结核病感染 史。其中经细菌培养确定感染结核病的猴的血清36份，通过病理诊断确定27只猴是活动性结核 病，9只猴是非活动性结核病。366份健康猴血清通过近5年来没有结核菌素阳性记录以及相关 145 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 实验动物 的临床症状确定。 1-2结核菌素的筛选牛PPD购自中国兽药监察所10万IU／m1；日牛PPD购自日本化学及血 监察所12500IU／ml，人PPD购自北京祥瑞生物制品有限公司50 IU／ml，牛型结核分枝杆菌提取 的旧结核菌素oT购自北京生物所10000 IU／ml。结核菌素作为抗原包被ELISA板，起始浓度5000 IU／ml，然后被比稀释，人PPD从50 IU／ml被比稀释；3份自然感染的阳性血清和l份阴性血清 1：i00稀释，通过间接ELISA试验对结核菌素的抗原的敏感性进行评价。 1．3 间接ELISA方法的建立阳性血清来自自然感染结核病猴的血清；辣根过氧化物酶标记的 兔抗猴的IgG抗体购自SIGMA公司。TMB底物显色液购自北京望尔公司。 0．1M碳酸