三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植性肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响.pdfVIP

中国中医药科技2012年5月第 19卷第3期 May2012Vo1．19No．3 ·229 · 三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植性 肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响 李华美 浦锦宝 郑军献 魏克民。 (浙江大学医学院附属儿童医院 ·杭州310003 浙江省中医药研究院 ·杭州310007) 摘 要 目的：观察三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。方 法：采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青 乙酸乙酯提取 物高、中、低剂量对瘤重、抑瘤率、脾指数、胸腺指数的影响，ELISA法检测血清中细胞因子 IL一2、IFN一 、 TNF一 含量。结果：三叶青各剂量组瘤重均低于模型组(P0．05或P0．O1)，并呈剂量依赖性；高、中 剂量组脾指数、胸腺指数较模型组增高，差异具显著性 (P0．05)；三叶青高、中剂量组 IFN一 TNF一 含量高于模型对照组，差异具显著性(P0．05)。结论：中药三叶青乙酸乙酯提取物具有抑制 Lewis肺癌 移植瘤作用，且能保护实验动物的细胞免疫器官，提高免疫功能。 主题词 肺肿瘤／中医药疗法 三叶青提取物／治疗应用 小鼠 三叶青 (Tetrastig hemsleyanumDielsetGilg)属葡 2．3 观察指标与测定 末次给药后24小时，摘取小鼠右侧 萄科崖爬藤属植物 ，主要分布于长江以南各地，生于阴湿山 眼球取血后脱颈处死，用眼科剪分离剥取肿瘤，胸腺及脾脏， 坡、山沟或溪谷旁林下，以块根或全草人药。具有清热解毒、 称取质量。计算各组小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾指数。抑瘤 祛风化痰 、活血止痛的功效。临床多用于治疗d,JL高热惊 率(％)=(对照组平均瘤重 一治疗组平均瘤重)／模型组平 厥、肺炎等症，现研究对肿瘤有防治作用 J。为探讨三叶 均瘤重 ×100％；胸腺 (脾)指数=胸腺 (脾)重 (mg)／10g体 青抗肿瘤作用的机制 ，本实验观察了三叶青乙酸乙酯提取物 重。取小鼠静脉血0．4—0．6ml，室温静置后离心取上清液， 对荷瘤小鼠免疫功能的影响，报道如下。 采用美国RD公司提供的试剂盒ELISA法检测小鼠血清 1 实验材料 IFN— 、TNF一仅、IL一2的含量，操作过程严格按照试剂盒说 1．1 实验药物 三叶青 ：由华东医药公司中药分公司提供。 明书进行 。 三叶青乙酸乙酯提取物制备：将 1kg三叶青用 8L乙酸乙酯 2．4 统计学处理 采用SPSS10．0版统计软件，计量数据以 提取3次 ，萃取液回收乙酸乙酯后 ，置于冰箱中保存备用。 均数 ±标准差 (±s)表示 ，组间差异的比较采用单因素方差 1．2 实验动物与瘤株 小鼠Lewis肺癌细胞株、C57BIM6J 分析，显著性水准为P0．05。 小鼠，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。 3 结果 1．3 实验试剂 小 鼠血清 IFN一 、TNF—Ot、IL一2检测试 3．1 三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠瘤体生长的抑制作用 剂盒：美国RD公司提供。 见表 1。 2 实验方法 表 1 各组小鼠瘤重、抑瘤率的比较 (I1,=10) 2．1 造模 取接种 Lewis肺癌瘤株 10～14天的C57BL／6J 荷瘤小鼠3只，颈椎脱臼处死，无菌条件下取瘤组织，剥离血 管及黏附的其它组织，在无菌平皿中剪碎，置组织研磨器中 加4℃生理盐水，轻轻研磨过滤 ，制成瘤细胞悬液 ，0．4％台 盼蓝计数，细胞活力大于95％，调整细胞为 1×10／ml。消 与模型组比较▲PO．05，▲AP0．O1(下同) 毒小鼠右前腋 ，取0．2ml上述瘤细胞混悬液接种于小鼠右前 3