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PRKAG3基因在中国地方猪种中的遗传变异 黄路生麻骏武任军丁能水郭源梅 艾华水李琳周利华陈从英 有可能的肉质数量性状候选基因位点．本研究在汉普夏、民猪和二花脸(共62个个体)中检测了 (共1505个个体)中的遗传变异情况进行了研究。等位基因200R在民猪和二花脸猪中是固定的． 汉普夏群体中没有发现单倍型，，—∞和，卜∞，这符合200Q与199V两个等位位点紧密连锁的假 的等位基因30T和526在中国地方猪种中都有很高的分布频率．然而，“有利”等位基因1991(据 报道它对肉质影响效应大于30T和刃口)在中国地方猪种(除民猪外)中的分布频率却很低。这 一矛盾的原因还有待解释。由于这三个点突变在藏猪中都存在，表明它们是一种古老的变异。另 外，在外显子1的第51个碱基上鉴别了一个新的一∥突变。这些结果暗示有必要进一步研究PRKA03 基因的这些突变与中国地方猪种肉质性状的相关性和在中国地方猪种中寻找PRKA03基因可能存 在的其它对内质性状有潜在影响的多态性位点． 关键词：猪、PRKAG3基因、肉质 PRKAG3基因编码一磷酸腺苷激活性蛋白激酶(AMPK)y3亚基的一个肌肉特异性同工物。 AMPK在调节真核生物的能量代谢平衡中起重要作用。早先在汉普夏猪种中发现PRKAG3基冈的 船DD9突变导致肌糖元含量升高70％，并对肉质和加工质量有较大影响I州。最近，又发现它的另 济价值【¨。所以，PRKAG3基因被认为是对猪肉质性状有显著影响的功能基因。中国许多的地方 猪种都具有优良的肉质特性。这里我们报道了PRKAG3基因的这四个错义突变在中国地方猪种中 的遗传变异情况以便为研究该基因对肉质的影响效应提供新的证据。 材料和方法 1．SNP基因型判定。 AGCTTCCTAGAGCAAGGAG．3’：反向引物：5-GGC I(正向引物：5-ATG 采用PCR．Hph GTG TGCATGATGT1ATGTGCCT．3’)、PCR．BsaHI／BsrBI(正向引物：5-GGAGCAAAT CAGACA ACGAAGCTCTGCTTC AG．3’：反向引物：5-CCC TT．3’)分别检测G52S、V1991、 GAGCTGTAACCA R200Q突变。采用PCR引物(正向引物：5-CATCCCCC-3’：反向引物：5-GCC TTG TCACCTTCC AAC I方法检测T30N突变。PCR反应体系为15uI总体积， CT一3’)和PCR．Sty 其中含50ng猪基冈组DNA，1．5mMMgCl2，0．125mMdNTP,0．3uM引物和IUTaq酶以及10xPCR ResearchWaltham，USA)上进行。PCR bu艉r(MBI，Shanghai，China)。PCR反应在PTCl00(MJ 扩增程序为：9412 产物用2U限制性内切酶在37℃消化12小时，然后将酶切产物在4％琼脂糖凝胶上电泳。 QIAquick PRISM∞3100遗传分析仪 PRISM@BigDyeTM末端测序试剂盒(V3．0)做测序反应，最后在ABI (AppliedBiosystems，FosterCity．USA)上测序。用Gapped ．．330．． software 比较序列，并用SeqMan软件(DNAStar 系祖代个体的序列排列在一起，鉴别SNP。 结果和讨论 G52S、V199I三个多态性位点的基因频率结果见表l。属于同一生态型的中国地方猪种有着更为 相近的等位基因频率分布。西方商业猪种比中国地方猪种在这三个突变位点上有更多的多态信息 含量(PIC)。多数中国地方猪种的等位基因频率与西方商业猪种的等位基因频率之间差异显著 (P0．05，