EB病毒潜伏膜蛋白1通过NFκB、AP-1调控抗凋亡蛋白分子Survivin表达.pdfVIP

中国癌症研究进展@ EB病毒潜伏膜蛋白1通过NFKB、AP一1 调控抗凋亡蛋白分子Survivin的表达 唐发清王海殷莉群唐敏顾焕华邓锡云曹亚 肿瘤是环境因素与宿主因素作用的结果，其中致瘤病毒是肿瘤发生的重要环境因素之一。 virus)是一种与鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、肺癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤 髓病毒(Epstein—Barr 00D跨膜蛋白，包括一个由24个氨基酸 功能的蛋白。LMPI是由386个氨基酸残基组成的62 残基组成的N末端胞浆域，6个跨膜疏水结构域以及一个与信号传导密切联系的由200个氨 基酸残基组成的羧基端胞浆域。在羧基末端有三个结构域(caIb∞计Ⅷi砌activatingregionl， of rein activator 1)”J。CTAR3介导Jak3／STAT(Janus kiratse3／signal锄∞王lloe培and 的活化“]。新近研究表明，LMPl功能性活化重要核转录因子NIⅧ、AP一1介导细胞增殖和抑 制凋亡等多种生物学效应，参与肿瘤的发生发展“oJ，其作用分子机制尚未阐明。 解离，kI}作为N№B的抑制子，在此信号转导中起关键的开关作用“】，N啪活化介导多个基因 AP一1是LMPI活化另一重要核转录因子，介导多种基因表达参与细胞的恶性转化等。AP一1 的活化主要受翻译后水平的凋节，特别是c—Jun的磷酸化，它控制AP一1的DNA结合和转录 活性嘲。 cell 亡调节点(Apoptosis一叫atedcycle 考察StavivlnRNA和蛋白表达。 资助项目 作者单位：410078长沙．中南大学湘雅医学院肿瘤研究所卫生部癌变原理重点实验室教育部癌变与侵袭原 理重点实验室 237 口病毒潜伏膜蛋白1通过NFr．B．AlP一1诃控抗凋亡蛋白分子Survivin的表达 材料与方法 I一)材料 HNE2：鼻咽癌细胞系HNE2为湖南医科大学肿瘤研究所建立的皿病毒 pTet—on—LMPI 阴性的低分化鳞癌细胞株“…。Pc：R进一步证实其LMPl为阴性。该细胞经两轮稳定的转染， 将四环素基因调控系统导人HNE2细胞，构建LMPI受四环素衍生物强力霉紊诱导表达的鼻咽 癌细胞系pTet一∞一LMPI 对照，分别将野生型B9—58来源的全长LMPl △boB稳定表达细胞系HNE2一△boB。 l二)方法 37。C。取1cDNA进行PCR扩增。 DNasel消化gDNA取4懈RNA，用MMV逆转录为eDNAV-g U PCR缓冲液(10nnnol／LTris—HCI(9．O)，15 dNTPs，5 rrenol／LMgCl2，200vmol／ml Taq酶)。Sur- vivin引物1：5’GCAC 2：5’TCTAGAcGGCAG(m二AGG托CACC3’。PcR反应条件：94℃5rain，94屯60s，鹋℃608，72℃ 60 s，28个循环，72℃10min。电泳，拍照。 HNE2和HNE2一 2．基因转染转染前24h在50Inl培养瓶上种植5×1驴Tet—oil—LMPI ／xIKB细胞，接GIBCO △I