蛋白质分离中非离子表面活性剂Triton+X-114及应用.pdfVIP

第30卷增刊 王正方等：蛋白质分离中非离子表面活性剂TritonX-114的应用 化学试剂，2008，30(增刊)，9—1l 蛋白质分离中非离子表面活性剂TritonX．114的应用 王正方1，．，邹明强。1，齐小花1。张卓勇2 (1．中国检验检疫科学研究院，北京100123；2．首都师范大学化学系，北京100037) 摘要：利用非离子表面活性剂TrilonX-114对奶粉蛋白进行浊点萃取，实现了疏水性与亲水性蛋白质的分离，经MALDI- TOFMS鉴定证实了分离结果的有效性，表明Triton X-114在生命科学中蛋白质分离领域的应用潜力。 关键词：非离子表面活性剂；浊点萃取；MALDI．TOFMS；蛋白质分离 中圈分类号：0652文献标识码：A 文章编号：025S．3283(2008)S-0009．03 mL乙腈、 浊点萃取法(Cloudpointextraction，CPE)是一质谱基质：向10ragCHCA中加入1 种近年来发展起来的萃取技术。它利用表面活性 水、0．1％TFA的混合溶液，y(乙腈)：V(水)： 剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象，通过改变实 验参数引发相分离，从而将疏水性物质与亲水性 旋1min，充分混匀后离心1rain，使用时取上清液。 物质分离…。表面活性剂分子通常由疏水基和亲 1．2 浊点萃取法原理 。 水基两部分组成，在水溶液中能够形成亲水基向 浊点温度以下，非离子表面活性剂溶液为一 外、疏水基向内的胶束。此时许多微溶或不溶于 个均相透明溶液。表面活性剂分子疏水基聚集成 水的物质可以与表面活性剂胶束结合，溶解度大 核，中间形成一个疏水的空腔；亲水基则向外扩 大增加，这种现象称为表面活性剂溶液的增溶。 张，使整个胶束可以稳定存在于外部水溶液环境 而一个表面活性剂水溶液在外界条件变化时(如 中。表面活性剂分子在水溶液中形成胶束的最小 micelleconcentra- 温度变化或添加其他物质)变浑浊并出现相分离 浓度称为临界胶束浓度(Critical 的现象即浊点现象。开始浑浊时的温度称为浊点 tion，CMC)。这一结构促使水溶液中的疏水性蛋 温度(cP)。浊点萃取就是利用表面活性剂的增 白质进入表面活性剂胶束的空腔中。当温度升高 溶作用(Solubilization)和分相(Phaseseparation)来至浊点温度以上时，非离子表面活性剂溶液突然 实现溶质的富集和分离旧J。目前该法已经成功应 出现浑浊。发生相分离。静置一段时间或离心后， 用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化以及 溶液分为明显的两相：一相为表面活性剂相，另一 环境样品的前处理中。本文将以天然蛋白质含量 相为水相。疏水性蛋白被萃取进入表面活性剂 丰富的奶粉为分离对象，具体探讨非离子型表面 相，亲水性蛋白则留在水相，从而实现了二者的 活性剂Tritonx．114在利用浊点萃取法分离疏水分离[3J。 性与亲水性蛋白质时的应用。 1．3 实验方法【3J】 样品液配制：称取1nag奶粉，溶于200皿10 1实验部分 mmol／LTris．HCI与150mmoL／LNaCI的混合溶液 1．1 主要仪器与试剂 7．4，混匀后放置30 X· 中，pH