新城疫病毒诱导鸡胸腺、法氏囊细胞凋亡的初步的研究.pdfVIP

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新城疫病毒诱导 鸡胸腺、法氏囊细胞凋亡的初步研究 李翔房慧伶曾芸 (广西大学动物科学技术学院广西南宁530005) Virus,胭r)引起的烈性传染桂疾病。最近研究表明,NDV可在体外谤导淋巴细胞凋亡,但NDV 在体内诱导淋巴细胞凋亡尚未见报道.本研究用新城疫病毒标准强毒F48E$株感染鸡,通过 光镜和电镜观察鸡的胸腺和法氏囊中淋巴细胞凋亡的形态特征并在光镜下计数和进行统计学 分析.光镜下,对照组胸膝争法氏囊凋亡淋巴细胞数量较少;感染蛆脾腺和珐氏囊琳巴细胞 出现了明显的细胞凋亡.无论是对照组还是感染组,凋亡细胞的数量在皮质多于髓质,而且 在皮质与越质交界处最多.电镜下可以清楚地观察到细胞凋亡过程和多种形态的凋亡细胞及 凋亡小律的形成与清除.意肇后期,在脚腺和法氏囊组织中发现有细胞变柱,坏死. 胸腺和法氏囊淋巴细胞平均凋亡率变化曲线图显示:胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率变化 规律的一样的.(1)感染组的凋亡率显著高于对照组;(2)对照蛆凋亡率随着天数的增加而增 大:(3)感染组的凋亡率随着天数的增加而增大,并于第三天达到最大.以后逐渐回落.统计 举分析表明:胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率感染姐与对照蛆比较呈枫显著差异(p0.01)。 实验姑果表明:NDV标准强毒F45B$人I感皋呜后可以请导胸朦和法氏囊淋巴细胞凋亡, 同时引起鸡胸腺和法氏囊淋巴细胞坏曩,造成淋巴细胞数量减少,导致免疫抑制. 关键词t断城疲病毒胸朦法氏囊细胞凋亡 Disease 新城痰(Newcast]eD1sesse,^刀)是由副牯病毒科新城疫病毒(Newcast]e Virus,彻n引起的烈性传染性疾病。NDV能够引起胸腺和法氏囊淋巴细胞大量坏死,导致 严重的免疫抑制。对NDv引起ND的病理学入们已经作过较详细的研究,但对NDV引起胸腺 和法氏囊淋巴细胞凋亡的研究较少。最近研究表明,NDV可在体外诱导淋巴细胞凋亡,使淋 巴细胞数量减少,导致免疫抑制,但NDV在体内诱导淋巴细胞凋亡尚未见报道。本试验通 过对人工感染NDV的鸡脾腺和法氏囊进行光镜和电镜观察,直接观察至0胸腺和法氏囊淋巴 细胞呈现细胞凋亡的典型特征.为阐明NDV引起免疫抑制的机理提供了直接证据。 1,材料和方法 1.1材料 1.1.1鸡:北海风翔畜禽有限公司提供。30只,品种:中麻鸡。 L1.2 NDV毒株:F48F.8株,广西大学动科院禽病研究室提供。 1.2方法 1.2.1检测母源抗体:血清学试验,呈阴性。 .124— i.2.2实验鸡分组,攻毒,饲养 实验鸡随即分为两组:感染组和对照组,每组15只,隔离饲养。25日龄攻毒:将新 城疫标准强毒F48E8进行l:10稀释,每只鸡肌肉注射0.5ml。 1.2.3取材 攻毒后ld,2d,3d,4d,5d连续取材。每天剖杀6只,对照组和感染纽各3只。取 鸡的肝,脾,胸腺,法氏囊进行姐清学试验。取鸡的胸腺和法氏囊进行如下固定:(】)光 镜观察的材料用lo%的福尔马林溶液固定。(2)电镜观察的材料用3%的戊二醛固定。 l2。4新城疫病毒的检测 血清学试验,呈阳性。 1.2.5光镜制样,观察 常规石蜡切片,HE染色,光镜观察,拍照。 1.2.6电镜制样,观察 1%锇酸固定,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色,透射电镜观察, 拍照。 1.2.7凋亡指数(%)的计算 光学显微镜下观察,随机选择10个视野,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数。 凋亡指数(%)=该范围内凋亡细胞数/该范围细胞总数*100% 2.结果 2.1光镜观察 对照组胸腺和法氏囊凋亡淋巴细胞数量较少;感染组胸腺和法氏囊淋巴细胞出现了明 显的细胞凋亡。无论是对照组还是感染组,凋亡细胞的数量在皮质多于髓质,而且在皮质 与髓质交界处最多。凋亡早期的淋巴细胞嗜碱性增强,体积缩小,胞浆浓缩,并与周围淋 巴细胞脱离。随后细胞核染色质凝集,边集,裂解成致密的球形染色质团块——凋亡小体, 最后被巨噬细胞吞噬。感染后期,在胸腺和法氏囊组织中发现有细胞变性、坏死。 2.2电镜观察 在电镜下可以清楚地观察到了细胞凋亡过程及形成的凋亡小体。因为在同一组织中细

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