实验一游离棉酚的测定.pptVIP

实验一 棉籽饼粕中游离棉酚含量的测定 一、实验目的 掌握国标法测定饲料中游离棉酚含量的原理、方法及结果的表示。 二、游离棉酚的测定方法概述 一般用在70%丙酮水溶液或在3-氨基-1-丙醇存在下，用异丙醇和正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用比色法、高效液相色谱法测定。 比色法：有苯胺法、三氯化锑法、甲氧基苯胺法、间苯三酚法、紫外分光光度法等。 苯胺比色法准确度高、精密度好，也是国标方法。 HPLC法准确度高，干扰少。HPLC法所测得的结果往往低于比色法。 三、方法原理 在3-氨基-1-丙醇存在下，用异丙醇与正己醇的混合溶剂提取游离棉酚。苯胺与棉酚结合为苯胺棉酚，在最大吸收波长（440nm）处进行比色测定。 该方法适用于棉籽粉、棉籽饼粕和配合饲料中游离棉酚含量的测定。 四、仪器与器皿 样品粉碎机及分样筛 分析天平 电动振荡器 恒温水浴锅 分光光度计 容量瓶、具塞锥形瓶、玻璃漏斗、移液管、量筒、玻璃珠 五、试剂 （1）异丙醇； （2）正己烷； （3）冰乙酸； （4）3-氨基-1-丙醇； （5）苯胺； （6）异丙醇、正己烷混合溶剂：6：4（V/V）； （7）溶剂A：取500ml异丙醇、正己烷混合溶剂，2ml 3-氨基-1-丙醇，8ml冰乙酸和50ml水，放入1000ml容量瓶中。再用异丙醇、正己烷混合溶剂定容至刻度。 六、操作方法 （1）游离棉酚的提取：称取1-2g棉籽饼粕样品于250ml具塞锥形瓶中，加入20粒玻璃珠。准确加入50ml溶剂A。塞紧瓶塞。于振荡器上剧烈振荡1小时（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤。过滤时在漏斗上加盖一表玻璃皿。弃去最初几滴滤液。收集滤液于100ml具塞锥形瓶中。 （2）以下操作见下表 （3）测定吸光度值：在440nm波长处以a0为参比溶液测定空白液b0的吸光度；以a为参比液测定样品测定液b的吸光度。从以b的吸光度值减去b0的吸光度值，得到校正吸光度A。 七、结果的计算 游离棉酚（mg/kg）= A×50×25×106 K×m×V×L×1000 式中：A—校正吸光度； K—质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1g-1l; m—试样质量，g； V—测定用滤液的体积，ml； L—吸收池长度，cm； 50—提取样品的提取液体积，ml； 结果表示与重复性 每个试样做两个平行，以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg。 ：重复性： FG＜500 mg/kg时，相对偏差不超过15%； FG在500 ~750mg/kg时，绝对偏差不超过75mg/kg FG＞750 mg/kg时，相对偏差不超过10%； YOUR SITE HERE FEED TOXICOLOGY, 2013 COLLEGE OF ANIMAL SCIENCE HZAU FEED TOXICOLOGY, 2013 HZAU 冷却至室温，用混合溶剂定容，摇匀，并静置30min 冷却至室温，用混合溶剂定容，摇匀，静置30min 加入2.0ml苯胺，沸水浴30min显色 用混合溶剂A稀释至刻度，摇匀 加入2.0ml苯胺，沸水浴30min显色 用混合溶剂A稀释至刻度，摇匀。 移取2份10ml的溶剂A于2个25ml棕色容量瓶中。 移取2份10ml滤液分别于2个25ml棕色容量瓶中 b0 a0 b a