应用软骨脱细胞基质修复软骨缺损的实验的研究.pdfVIP

其他专题 应用软骨脱细胞基质修复 软骨缺损的实验研究 张晨王江宁 胡刚 高景恒 大连大学附属医院整形外科 软骨组织的缺损的修复可通过下列三种方式来完成，即组织移植、人工替代物 和组织工程化软骨。组织移植包括自体移植、异体移植和异种移植。人工替代物有 医用硅胶和Gore—Tex。组织工程化软骨是应用生物学和工程学的原理，将种子细胞 在体外种植在天然的或人工合成的细胞外基质支架上合成新的软骨，然后修复损伤 的组织。这些方法有的已用于Jl缶床近百年，有的是材料学研究的新成果，有的处于 实验阶段。它们均因种种原因不能满足临床需要。自体组织移植会造成供区损伤以 及组织来源的局限性；同种异体组织移植术后早期尚可被宿主接受，但排斥反应不 可避免，异种组织引起的快速排斥反应难于克服，同时也存在社会、伦理方面的问 题；以聚合物为主的人工替代物植入后易引起的异物反应，继发感染并露出体外。 组织工程化软骨是未来最有希望的软骨修复方式，但目前尚存在种子细胞来源、优 选和优化支架材料、如何改善组织工程化软骨的力学性质及移植方式等问题。因此 如果从临床应用的可行性方面来看上述的组织修复方式，最佳的方式应为获得一种 天然的无免疫排斥反应性的组织替代物。异体或异种组织免疫源性的解决将会使其 在组织工程化组织未应用于临床之前成为组织修复的有效方式。而目前异体或异种 组织免疫源性的解决方式主要为以下两种：一是目前临床广泛应用的免疫抑制剂； 另外的方法是用脱细胞的方法去除组织的移植免疫源性。后者在九十年代中、后期 逐渐成为生物材料领域的又一热点。脱细胞处理的真皮、血管、膀胱等作为相应组 织的替代物相继开发成功。它们无论在动物实验及临床应用上都显示出了良好的应 用前景。我们通过对这些脱细胞方法的改良，找到了软骨的脱细胞方法，力学分析 表明，这种脱细胞的方法不改变软骨的力学性质；去除了软骨组织的移植抗原(另 文发表)。但对如何利用其修复软骨以及应用脱细胞的软骨能否修复缺损的软骨仍 不清楚。为此我们设计了实验对这些问题进行了研究，报告如下。 1．材料与方法 1．1兔耳软骨的脱细胞处理 取新西兰大耳白兔一只，体重及雌雄不限。注射过量846注射液处死。于耳根 部剪下双侧兔耳，仔细剪除软骨周边的软组织及软骨膜后剪成1．0cm×1．0cm大小 800 u／m1)中4。c保存待用。按从前使用的方法[1]改良后对软骨行脱细胞处理： 8．o)溶液中，溶液内含蛋白酶抑制剂，4oC恒 (1)浸入低渗0．02％Tris／EDTA(pH X一100 Tris／HCl液(体积，体积)内加蛋白酶抑制剂，4 温震荡48小时。(2)1％Triton 8．o)溶液中，4oC恒温震荡48小时。 37℃过夜。(5)重新置入0．02％Tris／EDTA(pH (6)以蒸馏水连续冲洗48小时，完成对软骨的脱细胞处理。常规HE染色证实细 胞已经脱出。分别以医用包装袋包装，封口机封口后，环氧乙烷消毒，搁置24小 时后用于实验。 ． 1．2软骨缺损的修复 ． 选用lo只纯种新西兰大耳白兔为实验动物，雌雄不限，5个月龄，2。5kg左右， 随机分为三组。每组三只，每只兔以一种方式修复。一只备用。三种修复方式为： ①脱细胞软骨加软骨膜，②脱细胞软骨，③软骨膜。2％硫喷妥钠按每公斤2ml腹 腔注射麻醉，两耳以碘酒、酒精消毒，从兔耳背侧中后部分切开，暴露兔耳软骨， X 分别在距兔耳根5cm处切除lcm lcm的兔耳软骨形成缺损，两只耳共4区，修复 后在缺损周边部用5加尼龙线固定、标记。 ． 1．3修复效果的观察 术后随时观察兔耳修复区的变化，分别在4周、12局t24周于修复区切取标