小檗碱的提取分离及鉴定.docVIP

盐酸小檗碱的提取分离及鉴定 黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。 [目的要求] 1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。 2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。 [实验原理] 小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。 小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。 季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色） 小檗碱（黄连素） 掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。 掌叶防己碱 本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。 [实验内容] 一、提取分离 黄连粗粉50g 加0.3％H2SO4500ml，浸渍20分钟 煎煮30分钟，滤过 药渣 滤液 加石灰乳调PH值至中性 放置10分钟，抽滤 滤液 加HCl调PH2～3 加滤液体积4～5％的NaCl，放置30分钟，抽滤 沉淀 滤液 （主要含小檗碱、掌叶 防己碱、黄连碱等生物碱） 加200ml水加热至澄明趁热抽滤 滤液 放置、抽滤 沉淀 二、生物碱类检识 1．化学检识： （1）丙酮加成反应：取样品0.05g，溶于50ml热水中，加入10％NaOH溶液2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬黄色结晶析出。此反应可用于原小檗碱型季铵生物碱的鉴别。 （2）漂白粉显色反应：小檗碱酸性水溶液中加漂白粉（或通入氯气），溶液即变樱红色。 2．薄层色谱检识 吸附剂：硅胶G 对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液 样品： 不同色带的甲醇溶液 展开剂： CHCl3-MeOH-冰HAc（7：1：2） 检视：先在紫外灯光（365nm）下观察荧光，再喷改良碘化铋钾试剂。 [实验说明及注意事项] 1．以硫酸盐代替盐酸盐，可增加生物碱的浸出量。 2．盐析最佳用量为4～5％。 [思考题] 1．根据小檗碱的性质，除用硫酸水溶液提取外，尚可用哪些提取方法？ 请设计一个提取工艺流程。 2．掌握根据化合物结构及色谱条件推测不同化合物的Rf值的方法。在本实验色谱条件下，请比较小檗碱和掌叶防己碱极性及Rf值。 3