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Western Blotting 的问题与对策 Western Blotting 的问题与对策 The world leader in serving science Steven Product manager Apr 24 ,2007 3.Western Blotting的问题与对策 3.Western Blotting的问题与对策 Western Blotting方法选择 Western Blotting方法选择 检测系统比较 检测系统比较 检测方法 检测方法 影响Western blotting成功的要素 影响Western blotting成功的要素 常见问题分析与对策 常见问题分析与对策 2 Western Blotting方法一: 直接法 Western Blotting方法一: 直接法 优点： 优点： 1.快速（一种抗体） 1.快速（一种抗体） 2.没有二抗交叉反应引起的非 2.没有二抗交叉反应引起的非 特异性条带 特异性条带 缺点： 缺点： 1.免疫反应性降低 1.免疫反应性降低 2.无信号二级放大 2.无信号二级放大 3.抗体标记费时昂贵,使用不方便 3.抗体标记费时昂贵,使用不方便 3 Western Blotting方法二: 间接法 Western Blotting方法二: 间接法 优点： 优点： 1.免疫特异性不受标记影响 1.免疫特异性不受标记影响 2.信号放大,灵敏度高（多个二抗结 2.信号放大,灵敏度高（多个二抗结 合位点） 合位点） 3.多种标记的二抗可供选择 3.多种标记的二抗可供选择 4.可选择不同的Marker 4.可选择不同的Marker 缺点： 缺点： 1. 交叉反应引起的非特异性条带 1. 交叉反应引起的非特异性条带 2.额外的二抗孵育以及条件优化 2.额外的二抗孵育以及条件优化 4 两种常用检测酶系统的比较 两种常用检测酶系统的比较 HRP （辣根过氧化酶) AP （碱性磷酸酶） 大小 40Kd 140Kd 最佳酶活性