幼儿春季病原菌培养基的制备实验方案.docVIP

幼儿春季病原菌培养基的制备b型流感嗜血杆菌简称Hib。Hib是一种引起婴幼儿严重疾病，甚至死亡的致病菌，在世界各地， Hib是引起儿童疾病的一个主要病因;Hib是导致5岁以下婴幼儿严重感染的主要病原体：在发展中国家，Hib侵袭性疾病是引起婴幼儿死亡的主要病因，主要引起肺炎 （2）意义 ①用来提供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的养料。 ②用来培养营养要求比较苛刻的异氧型微生物 ③具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。 ④用于鉴别不同类型微生物培养基特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这些特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。 二、实验目的 （1）了解微生物。 （2）了解半合成培养基的配制原理。 三、 实验基本流程 称量溶化调pH过滤加塞包扎灭菌搁置斜面无菌检查 由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异。 培养细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基，这是一种应用十分广泛的天然培养基，其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨 主要提供氮源和维生素，而NaCL提供无机盐。 五、实验药品及仪器 原材料：培养基原料：牛肉膏 3.0克，蛋白胨10.0克， NaCl 5.0克，水1000ml，pH 7.4~7.6 仪器及器皿：恒温箱、手提式高压蒸汽灭菌器、电炉、天平、搪瓷缸、玻璃棒、量筒、吸管、中试管、三角烧瓶、灭菌培养皿、漏斗、分装漏斗、药匙、铁架台、棉塞、1cm厚板条、酒精灯、试管筐、棉线绳、纸或纸绳、牛皮纸、标签、PH试纸、滤纸、弹簧夹 六、实验步骤 （1）称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。 加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。灭菌 将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 无菌检查 将灭菌的培养基放入37的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。