发酵——种子的扩大培养.pptVIP

4、接种量的确定 移入种子的体积 接种量＝ ————————— 接种后培养液的体积 过大过小都不好，以实践定，如大多数抗生素为7-15%。但是一般认为大一点好。 通常接种量：细菌1~5%，酵母菌5~10%， 霉菌7~15%，有时20~25% 双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。 倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。 5、种龄 种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。 6、种子的质量要求： 量：要求达到一定的浓度 质: 形态 （生长处于某个阶段、均匀等等） 理化指标：C、N、P的含量，pH，产物生成量 酶活等 无污染 单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态； 霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。 种子异常分析 菌种生长速度，过快或过慢 菌丝结团 菌丝粘壁 本章小节： 了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念 理解种子扩培的目的和要求 掌握控制种子质量的基本方法和手段 * 生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基（培养基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋白胨，10克葡萄糖和20克琼脂与升水中）的斜面上，于4℃冰箱内保藏。每年移种3-4次。将保存的酵母菌种接入含10ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2-3天后，再扩大至含有250-500ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2天后，移种至含有5-10L麦芽汁的卡氏培养罐中，于15-20℃培养3-5天即可作100L麦芽汁的发酵罐种子。从三角瓶到卡氏培养罐培养期间，均需定时摇动或通气，使酵母菌液与空气接触，以有利与酵母菌的增殖。 第四章 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与要求 种子制备实例 种子制备的技术概要 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 第一节 种子扩大培养的目的与要求 种子扩大培养的概念: 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 第一节 种子制备过程举例 一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 1、斜面 (AS1.299) 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2 培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 培养条件：32℃，生长18-24小时 生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过 3次 2. 一级种子（摇瓶） 培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培 养12小时。 培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1%，硫酸镁0.04% pH7.0 培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基 本接近于发酵培养基 一级种子质量要求 种龄：12h pH值：6.4± 0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查： (-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应 3. 二级种子(种子罐) 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%）， 32℃培养7-10个小时 培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5% 培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基 通风量: 50L种子罐1:0.5,搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3,搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25,搅