叶绿素的提取.pptVIP

一、实验目的 掌握叶绿体色素的提取方法； 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤； 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 二、实验原理 1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2.色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 四种色素的化学性质 均为亲脂性亲水性： 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素 根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度： 叶绿素b叶绿素a 叶黄素胡萝卜素 三、叶绿素的光学性质 四、实验材料与试剂 新鲜的菠菜叶片。 95%乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。 量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。 将深绿色的菠菜叶剪碎放入研钵中。 放入少量的SiO2和CaCO3，再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。 将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。 2、叶绿体色素的分离——（纸层析法） * * 叶绿素吸收光谱最强的吸收区有两个：一个在波长640~660nm的红光部分，另一个在波长430~450nm的蓝紫光部分。在光谱的橙光、黄光和绿光部分只有不明显的吸收带，其中尤以对绿光的吸收最少。胡萝卜素和叶黄素的最大吸收带在蓝紫光部分，不吸收红光等长波的光。 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。 五.实验步骤 1. 提取叶绿素 研磨法提取光合色素 材料剪碎 研磨法 加入有机溶剂 研磨、匀浆 过滤 提取液 具体实验步骤（提取色素） 用滤纸条浸色素提取液（试管1），吹干，反复多次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。 实验关键 1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。 2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。 3.层析时不要让滤液细线触及层析液。 1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2.在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。 3.分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。 叶绿体中色素的提取和分离 实验结果 * 叶绿素吸收光谱最强的吸收区有两个：一个在波长640~660nm的红光部分，另一个在波长430~450nm的蓝紫光部分。在光谱的橙光、黄光和绿光部分只有不明显的吸收带，其中尤以对绿光的吸收最少。胡萝卜素和叶黄素的最大吸收带在蓝紫光部分，不吸收红光等长波的光。