提高肾脏穿刺标本免疫组化切片质量的方法和体会.pdfVIP

维普资讯 ·486 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2004Aug：20(4) 提高肾脏穿刺标本免疫组化切片质量的方法和体会 颜 亚晖 郑 晖 【关键词】 免疫组织化学；肾 ；穿刺；显微切片术；质量控制 方法 (1)所获结果相 同。 【中圈分类号】 R446．8 【文献标识码 】 B [3t章编号】 1001—7399(2004)04—0486—02 由于肾组织在显微镜下呈囊腔状结构 ，肾小管上皮细胞 又含有丰富的内源性过氧化物酶 “：，在免疫组化染色时常出 现结构不清晰，阳性 信号定位差 ，背景非特异性 着色深等现 象，影响诊断的准确性 。针对这些 问题，笔 者采用 几种方 法 进行 比较，经反复摸索 ，发现用 TritionX-100处理切 片，蛋 白酶 K修复抗原解决 了上述 问题 ，获得 了满意的效果，现将 具体方法介绍如下 。 1 材料与方法 1．1 标本 收集湘雅医院肾脏穿刺标本，1O 中性福尔马 林固定 ，常规脱水 、石蜡包埋 ，2btm厚连续切片 ，裱于多聚赖 氨酸处理的玻片上，6O℃烤 片。 1．2 试剂 1 TritionX-100、蛋 白酶 K、兔抗人 IgG、IgA、 IgM、C3及 EnVision试剂盒均系上海长岛公司产 品。 1．3 方法 A组 ：常规石蜡切 片脱 蜡至水；1％ TritionX- 10037C处理 20min，双蒸 水洗 5min×3；3 H2O2甲醇 20min，以阻断内源性过氧化物酶，双蒸水洗 5min×3；分别 用蛋 白酶 K、胰蛋 白酶、胃蛋 白酶 37℃消化 20min和高火档 微波修复抗原 10min，PBS洗 5min×3；5 小牛血清 37℃ 30min，以阻止非 特异性反 应 ；分别加抗 IgG、IgA、IgM、C3 圈 l 肾小球结构清晰，阳性信号定位准确 ，背景非特异性着 (浓度均为 1：300)，37℃孵育 1h，PBS洗 5min×3；加 En— 色极浅 ，EnVision法 圈2 肾小球结构欠清晰，阳性信号 Vision二抗 37℃孵育 30min，PBS洗 5min×3；DAB显色， 定位欠准确，背景非特异性着色深，EnVision法 水洗 ．苏木 精衬染 ，干燥 ，中性 树 胶封 固。B组 ：取 消上 述 3 讨论 1 TritionX一10037C处理 20rain步骤 ，其余 同A组 。 肾脏穿刺标本 的免疫组化检测 ，虽然是一种常用的辅助 2 结果 诊断方法 ，但 肾穿组织小 ，固定充分 ，抗 原决定簇封 闭较强 ， A组 ；蛋白酶 K消化组 的组织结构清晰 ，阳性信号定位 阳性信号弱，甚至出现假阴性。笔者经过反 复摸索 ，发现用 准确 ，背景非特异性着色浅 (图 1)；胰酶消化组的组织 阳性 TritonX一100处理切片、蛋 白酶 K修复抗原获得满意的结 定位准确 ，但背景 比蛋 白酶 K消化的稍深 ；微波处理组 的组 果 。由于 TritonX-100是一种无离子表面活性剂(俗称清洁 剂)，能迅速溶解细胞 膜上的脂质成分 ，增 强细胞膜 的通透 织阳性较好 ，但有边缘效应 ，且易出现脱片现象；胃酶消化组 的组织结构保存差 ，阳性信号很弱或无。B组：蛋 白酶 K、胰 性 ，在阻断前用它处理切 片，不仅能增强 H 0 的阻断和血 清的封 闭效果 ，降低背景，还可使抗体顺利地进 入组织 与相 蛋白酶或微波处理组 的组织结构阳性信号较弱，存在不 同程 度 的非特异性 着色，背景着色深 (图2)；胃蛋 白酶 消化组 与 应抗原结合 ，增强 阳性信号。与其它常用抗原修复方法 比