DEAEphenyl吸附量验证方案.docVIP

文 件 编 号: STP-VP- DEAE/phenyl吸附量验证方案 复制号： 起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 起草日期： 审核日期： 批准日期： 颁 发 部 门： 质量部 生效日期： 分 发 至： 质 量 部 □ 生产部 □ 人事行政部□ 销售部 □ 1.目的： DEAE/phenyl是INDEX层析系统的主要生产部件，为能更好确定DEAE/phenyl的吸附量与提高产品质量，所以对DEAE/pheny胶的吸附性能进行确认。 2.范围： 适用于DEAE Sepharose/phenyl Sepharose 。 3.验证小组成员及职责： 验证小组成员 部门 职 责 备 注 4．概述： 当DEAE/phenyl胶内蛋白的吸附量接近饱和时，蛋白开始从胶中流出，出口浓度逐渐上升，最后达到进样的蛋白浓度，即吸附达到完全饱和。验证依据《DEAE Sepharose F.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程处理平衡DEAE Sepharose F.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在mg/ml，线性流速：80cm/h。上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在-40mg/ml，线性流速：80cm/h。 上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在-43mg/ml，线性流速：80cm/h。上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在-45mg/ml，线性流速：80cm/h。 上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在-50mg/ml，线性流速：80cm/h。清洗 以80cm/h的线性流速冲洗2-4倍柱床体积的10mMT.E pH7.2，使紫外检测仪示数冲到基线。洗脱用0.0MNaCl-10mMT.E pH7.2洗脱倍柱床体积，线性流速：80cm/h。 用0.04MNaCl-10mMT.E pH7.2洗脱4-5倍柱床体积，线性流速：80cm/h。 用0.1MNaCl-10mMT.E pH7.2洗脱3-4倍柱床体积，线性流速：80cm/h。 收集及取样 按《中间产品收集和取样标准操作规程》操作。《SDS凝胶电泳标准操作规程》《》浓度测定 按《中间产品浓度测定标准操作规程》操作。 层析柱处理DEAE Sepharose F.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程 清洗流穿液 上样液 上样流穿液 清洗流穿液 上样液 上样流穿液 清洗流穿液 上样液 上样流穿液 清洗流穿液 上样液 上样流穿液 清洗流穿液 浓度 蛋白 有 无 结论： 表2 电泳图谱粘贴处 注：比较方法 1.下样液与上样液比较（初杂程度） 2.每个方案的下样液进行比较（除杂效果） 结论： 表3 方案 样品名称 相关蛋白含量 备注 1 DEAE（1）收集液 2 DEAE（1）收集液 3 DEAE（1）收集液 4 DEAE（1）收集液 5 DEAE（1）收集液 结论： 中山海济 文件编号： STP-VP- Page 4 of 4