双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究.pdfVIP

MEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 时珍国医国药2010年第2l卷第1期LISHIZHEN 2010VOL．21NO．1 双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究 宋伟舟，孙剑峰，刘玉应，冯 敏，蒋 春，邓小晨+ (四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都610064) 摘要：目的从已分离的具有红景天苷转化能力的霉菌中，筛选能协同发酵红景天苷的双菌株组合。方法以重氮盐比色 法初步确定茵株组合和双茵株协同主要发酵条件，并用高效液相色谱(HPl．C)法复筛。结果选出的最优双菌株组合编 有效成分提高94．68％。结论表明双菌株的协同转化作用明显优于单菌株。 关键词：双菌株发酵；红景天苷； 酪醇； 重氮盐此色法： 高效液相色谱 中图分类号：R283．1文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2010)01-0156-03 crenulata d。 红景天为景天科(Crassulaceae)红景天属Rhodiola2．1．3红景天发酵培养30℃，200r／min，时间为2—4 Hook．f．et Thorns植物的根及根茎‘“，我闷红景天资源大多分布2．2提取方法红景大发酵液用75％的乙醇按照1：8的比例 在高寒地区。其有效成分卡要是红景天苷及其苷冗一酪醇。二者 分别提取3次，合并滤液，得到发酵提取液，用于重氮盐比色法测 均具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射、抗病毒、抗肿瘤等作用。红 定和HPLC检测。 景大制品是抗高原反应的必备品。随着红景天产品广泛开发和 2．3测定方法 应用，过度采挖使天然资源R趋枯竭“，对高原藏区生态环境的 2．3．1重氮盐比色法【61取发酵提取液5ml，加入10％的醋酸 破坏严重。因此，保护性开发野生资源，提高红景天有效利用率 铅5 ml，定容至25 ml和饱和硫酸钠2 ml，沉淀、离心，取上清液5 显得更加重要。在其他一些植物药材中，苷足从无活性的苷元脱 ml丁20ml比色管中，其中加2％碳酸钠3ml及重氮化试剂3 去糖基获得的，可以采用酸解或酶法来水解糖基，简便易行。与 ml，摇匀显色5min，冉加5％氢氧化钠0．5ml，显色15min，整个 之不同，红景天苷和苷元生成是合成代谢，其前体来源不太清楚， 过程在4℃以卜．进行，稀释10倍，在489am波长下测定吸光度。 从而造成提高』￡有效成分研究的难度。目前已有的研究主要包 以吸光度高低作为总有效成分(苷和酪醇的总茸)的初筛指标。 括：添加前体物和酶催化剂合成红景天苷、化学合成法‘3J、植物 2．3．2HPLC检测【刊色谱条件：岛津Lc一6A高效液相色谱仪； 细胞组织培养和基因克隆等方法4j|，但与应用还有不小距离。 nm×4．6 色谱柱为YWM—C．R(10u)200mm；流动相为V(甲醇)： 文章在前期研究中，已分离到财红景天苷具有转化能力的菌株， V(高水)=25：75；检测波长275 nm；自然pH；柱温为审温；进样 通过单一菌株发酵，最高叮使红景天原药材中苷含量提高 ml·min一。精密称取红景天苷、酪醇标准品 量：20汕l；流速1．0 52．83％。本研究进一步采用双菌株协同发酵红景天，使其中苷25．00 mg，分别置于25mI的容量瓶中，尤水乙醇溶解定容，制成 含最大大高于单一菌株发酵。混合菌株发酵提高红景天苷和酪 浓度为1．00 mg·ml。1的标准品，取苷标准品溶液进样2，4，6，8，