实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色.pptVIP

染色结果 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果 附：油镜的使用 双目显微镜 单目显微镜 2.油镜的原理 油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。  双层瓶 香柏油 二甲苯 * sporangiophores no rhizoids aseptate hyphae * sporangiophores rhizoids are opposite sporangiophores aseptate hyphae 实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色 革兰氏染色法 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色 一、实验目的 学习掌握微生物制片及简单染色的基本 技术 初步了解细菌、放线菌、酵母菌及 霉菌的形态特征和相互区别 巩固显微镜操作技术及无菌操作 技术 二、基本原理 染色前必须固定细菌 其目的有二： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上 二是增加其对染料的亲和力 常用的有加热和化学固定两种方法 固定时尽量维持细胞原有的形 常用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与微生物细胞结合使其着色。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带 正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红 等酸性染料染色 三、实验器材与试剂 菌种：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养的12-18小时枯草芽 胞杆菌和培养24h的金黄色葡萄球菌 溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、 吕氏碱性美蓝染液、革兰氏染色用碘液、 乳酸石炭酸棉蓝染液 仪器和其他用品：双层瓶、接种环、接种铲、接种针、 平皿、U型玻璃棒、解剖针、 解剖刀、 50%乙醇、20%甘油、高氏一号培养 基平板、马铃薯琼脂薄层平板等 四、操作步骤 安全警示 1.加热固定时要使用载玻片夹子，以免烫伤。不要将 载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂 2.使用燃料时避免粘到衣服上 3.放线菌和霉菌制片要减少空气流动，避免吸入孢子 4.实验完毕后洗手，金黄色葡萄球菌为条件致病菌， 二甲苯为有毒物质。 细菌制片及简单染色 涂片：将玻片分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操 作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌于玻 片的水中，并充分混匀涂成薄膜 干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥 固定：涂面朝上，通过微火2-3次 染色：玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色1分钟 水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水变无色为止 （注：勿冲去菌体） 干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干 镜检：显微镜下观察并记录 四、实验步骤 1、菌落形态观察： 2、细菌简单染色： 3、细菌革兰氏染色。 注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。 染色过程： 涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→镜检 注意事项： 涂片：取菌量不能太大 干燥：自然干燥 水洗：水流不能直接冲在涂菌处 滴加少量水 挑取菌体 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 放线菌革兰染色 青霉的显微结构 曲霉的显微的显微结构 毛霉显微结构 根霉显微形态 电镜下的酵母 革兰氏染色法 一、目的要求 学习掌握革兰氏染色法