牛奶中挥发性脂肪酸的气相色谱分析.pdfVIP

牛奶中挥发性脂肪酸的气相色谱分析 刘贤明 赵文报 杨 辉 梁锦添 广（西农学院中心实验室，南宁） EastmanIoplus是美国密执安州立大学营养 流量50ml/min。进样量：1蘬l. 生化教授R.M.Cook发明的新的产奶母牛营养 最小检测量 （裰柱）：异丁酸2.41ng；异戊酸 添加剂，它是异丁酸、异戊酸、2-甲基丁酸与戊酸的 +2-甲基丁酸4.34ng晃戊酸2.19ng。 混合盐，可使奶牛的产奶量增加10％而不影响奶牛 结 果 与 讨 论 的健康、代谢、繁殖和牛奶的质量，不干扰消化道 内的其它营养物质[]Ｎ我院今年首次在我国开始 I.色谱分离和定性 四种挥发性脂肪酸的分 这项试验。试验前必须测定该添加剂的几种异位酸 离如图1,2。 在牛奶中的残留量，但有关分析方法国内未见报 道。我们参考国外的资料，立足于本实验室的条 件，经过反复探索研究，建立了一套准确、可靠的 分析方法，获得了满意的结果。 材 料 与 方 法 1．试剂 丁醇、戊醇为色谱纯。硫酸镁、浓 磷酸、无水乙醚，0.1mol/LKOH、1%甲酸为分析 纯。异丁酸、异戊酸、2-甲基丁酸和戊酸标准品、 去泡剂A,SP-1200,CarbopackC柱填料均由美国 柯达公司依斯特曼化学公司提供。 2.样品制备 在5L蒸馏瓶中依次加入奶样 2L,MgSO4?·7H2O 102.5g，去泡剂5滴，玻璃珠 20粒，O.1mol/LKOH 200ml，内标液1000ml，浓 磷酸90ml，强化奶样和标准样按需要浓度加入挥 发性脂肪酸(VFA)标液，减压蒸馏，收集约150ml 蒸出液。用30ml浓磷酸酸化蒸出液，用400ml乙醚 分三次重复提取，醚相通N2气挥发至2.0 3.Oml， 密封存入冰箱待测。 3．气相色谱分析 色谱仪： 日本岛津GC- 9A带C-R3A数据处理机。色谱柱：I.GP10％ SP-1200/1％HPO4?80/100目），ChromosorbW AW,2.1m×3mm(I.D.)玻璃柱。柱温：在110姹保 持2min，再以5?/min升至140，保持10min。 Ⅱ颍．0.3％Carbowax20M/1％H3PO4(60/80 目)CarbopackC,2.1m?3mm (I,D,)玻璃柱。柱 温：在120℃保持1min再以6?/min升至155， 保持10min。 汽化室及检测器温度：210 。载气 高（纯N2， 奶样中的四种酸在色谱图中的位置和保留时间 与标准样的图谱完全吻合。裰柱可以很好地分离异 丁∷酸和戊酸，但分不开异戊酸和2-甲基丁酸。Ⅱ柱 则可以实现后两种酸的分离，只是分离度稍差且容 易拖尾，每进几次样要用0.1% 甲酸反复冲柱。由 于异戊酸和2-甲基丁酸是两种同分异构体，沸点相 近，蒸出速度几乎相等，等量的异构体可以产生大 小近似相等的色谱峰，而且这两种酸在牛奶中的浓 度之和小于 100ppb没有必要进一步分离[2]。因 此，本法只着重研究这四闹种 VFA在裰柱上的分 离情况。 2．标准曲线的线性 四种VFA在牛奶和水中的标准曲线如图3,4。 由奶样预试验可知，大多数奶样中VFA浓度小于 200ppb。故标准曲线浓度范围取0～300ppb以标 样中酸浓度为横座标，对酸的峰面积与内标峰面积 的比率Y作图，即得标准曲线。因空白奶样中含有 这四种 VFA所以牛奶标样的标准曲线要扣除背 景。对各组实验数据作数理统计得各标准曲线的相 关系数为0.98 0.99，达到美国柯达公司依斯特曼 化学公司的分析水平 其（相关系数为0.96 0.99)[2]。 3．全过程回收率 取对照组同一头牛的鲜奶，用50,100,150ppb VFA强化奶样，测得平均回收率为：异丁酸91.14％ ±5.85％，异戊酸+2-甲基丁酸105.6%±4.62％，戊 酸99.81%±16.65%，接近依斯特曼化学公司的水 平 其（四种酸的平均回收率依次为82％±10.3％， 取同一头牛