3组,猪带绦虫基因工程疫苗第研究进展.docVIP

猪带绦虫基因工程疫苗的进展才学鹏 (中国农业科学院兰州兽医所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046) 【摘要】病是一种重要的政治经济病。研制有效、安全的疫苗是该病的热点。随着分子生物技术的发展，基因工程疫苗已成为该领域的重点。目前，重组抗原疫苗、核酸疫苗和合成肽疫苗等已取得较大的进展，在噬菌体疫苗和活载体疫苗等方面也做了许多尝试，取得了很好的效果。重组抗原疫苗发展较快。有望在近几年上市，而其它类型疫苗还有诸多的问题要解决，其商品化进程尚需很长一段时间。猪囊尾蚴病虫作为一种重要的人兽共患寄生虫分为亚洲和非洲/拉丁美洲两个基因型。亚洲病，不仅对养猪业造成重大的经济损失，还严重危害 基因型主要包括中国和印度等地方株，非洲/拉丁美洲人类的健康。近期的流行病学资料显示，美墨边境猪 两个基因型主要包括墨西哥和厄瓜多尔等地方株。才带绦虫病的感染率达3%，在美国加尼佛尼亚州部分 学鹏、贾万忠等根据羊绦虫45W设计引物，克隆了猪地区，猪囊尾蚴病的血清阳性率高达1.8%，表明猪带 带绦虫中国株TS045W A、B、C三型转录本共16个。绦虫病有重新抬头的趋势。尽管驱虫药在控制猪囊尾 比较发，中国株和墨西哥株之间的蚴和人绦虫感染中均发挥过重要作用，但化学药物的 TS045W-4B和TS045W一1C的相似性达100%，非常长期使用出的药物残留和对环境安全的危害的问题 保守，而其它的转录本之间都存在明显的变异。 日益突出。传统的全囊虫抗原、分泌，1弋谢(E/S)抗 证明，经过修饰的45W--4B不仅能在大肠杆菌中实原、异源抗原以及六钩蚴抗原疫苗都能对囊虫病起到 高效可溶性表达，表达产物在4稳定保存3个月，而很好的预防作用，但都不能通过体外培养增殖，因而 且对猪的减虫率达94.0%以上。上述结果提示，来源受到极大地限制。因此，研制安全、有效的基因 45W-4B蛋白是良好的疫苗候选抗原，45W-4B疫苗工程疫苗已成为猪囊虫疫苗的主要发展方向，具有广阔的应用前景。经过二十多年的努力，目前在该领域已取得了很大的进展。 以DIG标记的T018 eDNA为探针，与六 钩蚴表达文库杂交，筛选出TSOLl8克隆，与T018、1重组抗原疫苗 TSAl8 cDNA序列比较，TSOLl8 eDNA3端非翻译区有 随着寄生虫生物学、免疫学和分子生物学等与疫 17个核苷酸的缺失，推测TSOLl8表达的蛋白可能具苗开发相关学科 的深入，用免疫化学分析方法鉴 有宿主保护性，具有开发实用疫苗的潜力。Flisser等定宿主保护性抗原，应用重组DNA技术生产疫苗抗原 用200斗g TSOLl8的大肠杆菌表达产物免疫猪，在三已成为可能。同时棘球蚴和羊囊虫重组抗原疫苗的问 个独立的疫苗实验中均获得了几乎100%的保护。为世，为其他绦虫病新型疫苗的 提供了典范。 了提高重组TSOLl8抗原的稳定性，袁改玲等通过对 1989年Johnson等首先开发了羊绦虫(Z ovis) TSOLl8基因修饰和对部分密码子的改造，实了该基重组45W抗原疫苗，对羊的保护率达98.O%。45W-GST 因在毕赤酵母中的高效表达，表达量达2.59/L，而且疫苗的效果已在新西兰得到确证，无论是自然感染或 表达产物分泌到培养液上清中，通过离心和凝胶层析实验攻击感染的保护率都在90.0%以上。绦虫抗原具 即可得到纯化，而且该重组蛋白在酵母中进行了糖基有明显的种间交叉保护性，提示用GST-45W重组疫 化修饰，稳定性较大肠杆菌表达产物大打提高。用纯苗抗原预防带科绦虫其他相关种侵袭的可能性。Gauei 化产物制备的疫苗在两次免疫效力试验中，分别可诱等根据T.ovis 45W基因设计引物，从六钩蚴 导猪产生94%和100%的保护。这一 为中克隆了45W基因(Ts045W)，发Ts045W与T045W TSOLl8重组疫苗的大规模生产提供了重要技术支持，以及TSA9非常相似，推测其编码的蛋白可能有作为 为其商品化进程注入了强有力的动力。疫苗预防囊虫感染的潜力。按照线粒体基因组的变异，2核酸疫苗 的氨基酸序列化学合成多肽GKl和GK2，GKl能诱导 对鼠巨颈绦虫40.O%一71，0%的保护。免疫荧光 显 核酸疫苗又名基因疫苗和DNA疫苗，是将外源基 示抗GKl抗体可与虫卵、六钩蚴、囊虫和绦因插人真核表达载体中，构建成重组质粒直接注入动 虫发生强烈反应。所以该多肽可作为猪囊尾蚴疫苗候物体内而使动物获得免疫的一种新型疫苗。孙树汉等 选抗原。进一步 证明，GKl至少有一个能刺激CD8用从猪囊尾蚴eDNA表达文库筛选的cCl抗原基因构 增殖的T细胞表位，可刺激细胞培养上清产生高水平建了peDNA3一eC 1 DNA疫苗，用该苗免疫小鼠可诱导 的卜干扰素和低水平的IL一4。Huerta等根据巨颈绦虫抗