分子标记的发展和应用.pdfVIP

第 23卷 第 2 期 周口师范学院学报 2006年 3 月 Vo l. 23 No. 2 Jou rnal of Zhoukou Norm al U n iversity M ar. 2006 分子标记的发展及应用 马克世 , 胡炳义 (周口师范学院 生命科学系 ,河南 周口 466000) 摘 要 :随着分子生物学的迅速发展 , DNA 分子标记越来越受到重视. 本文介绍了分子标记的发展 ,论述了 DNA 分子标记在基因组作图、基因克隆、物种亲缘关系分析及疾病诊断等方面的应用. 关键词 : DNA ;多态性 ;分子标记 中图分类号 : Q523 文献标识码 : 　A 　　文章编号 : 167 1 9476 (2006) 02 0081 - 04 DNA 分子标记是以生物大分子的多态性为基础的遗传标记 ,是 DNA 水平遗传变异的直接反映 ,克服了传统的形态标 记 、细胞学标记和生化标记易受外界因素 、生物个体发育阶段及器官组织差异的影响 ,因而具有广泛的应用前景. 随着分子 生物学技术的发展 , DNA 分子标记的研究愈加活跃 ,相继有数 10种不同的分子标记技术问世. 1　分子标记的发展 1. 1　第一代分子标记 ( ) [ 1 ] 限制性片段长度多态性 restriction fragm ent length po lymorph ism s, RFL P 是最早应用的第一代分子标记技术 ,是检测 DNA 在限制性内切酶酶切后形成的特定 DNA 片段的大小的方法 ,反映了 DNA 分子上不同酶切位点的分布情况. 因此 , DNA 序列上的微小变化 ,甚至 1个核苷酸的变化 ,也能引起限制性内切酶切点的丢失或产生 ,导致酶切片段长度的变化. R FL P标记的等位基因具有共显性的特点 ,结果稳定可靠 ,重复性好 ,特别适用于构建遗传连锁图. 但是 ,在进行 RFL P分析 时 ,需要对该位点的 DNA 片段做探针 ,通常用放射性同位素及核酸杂交技术 ,这样既不安全又不易自动化. 另外 , RFL P对 ( ) DNA 多态性检出的灵敏度也不高 , RFL P连锁图上还有很多大的空间区 Gap s . 为了克服 RFL P技术上的缺点 , W illiam s等人于 1990 年建立了随机扩增多态性 DNA ( R andom Amp lified Po lymorp h ic ) [2 ] DNA s, RA PD 技术 , 由于其独特的检测 DNA 多态性的方式使得 RA PD 技术很快渗透于基因研究的各个领域. RA PD 是建 ( ) 立在 PCR 基础之上的 ,用一个随机引物 8 ～10 个碱基 非定点地扩增 DNA 片段 ,然后用凝胶 电泳分离扩增片段来进行 DNA 多态性研究. 对任一特定引物而言 ,它在基因组 DNA 序列上有其特定结合位点 ,一旦基因组在这些区域发生 DNA 片 段插入 、缺失或碱基突变 ,就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化 ,从而导致扩增产物的数量和大小发生改变 ,表现 出多态性. 与 RFL P相比 , RA PD 方便易行 , DNA 用量少 ,设备要求简单 ,不需 DNA 探针 ,设计引物也不需要预先克隆标记或 进行序列分析 ,不依赖于种属特异性和基因组的结构 ;合成一套引物可以用于不同生物基因组分析 ,用一个引物就可扩增 出许多片段 ,并且不需要同位