16S～23SrDNA间隔区序列在分枝杆菌分类鉴定中应用研究.pdfVIP

卷 期 微 生 物 学 报 6’ ( DEFG6’ /EG( 年 月 $’’’ !’ !#$%’()(*($,-$ HICEJ- $’’’ + !*+!$,+-./0 间隔区序列在分枝杆菌 分类鉴定中的应用研究 张灵霞 庄玉辉 何秀云 张晓刚 李国利 （中国人民解放军 医院结核病研究室 北京 ） ,’ !’’’! 摘 要：采用聚合酶链反应（ ）技术对分枝杆菌 间隔区序列进行扩增，其产 123 !*+!$,+-./0 物经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ ），并通过计算机聚类分析，在基因水平上评价其对分枝杆菌 1045 分类与鉴定的意义。退火温度 时， 扩增的敏感性为 ／ ，而 时的敏感性为 6(7 123 (’’8 : (’7 9 ／ 。已通过对 种分枝杆菌和 种非分枝杆菌的特异性实验，结果表明：扩增条带多集中 ( : $$ ;9 在,’’!*’’ 之间，多数受试快速生长分枝杆菌和非分枝杆菌扩增条带多且分子量较大，缓慢 ; 生长分枝杆菌扩增条带相对较少，分子量较小。1045和计算机聚类分析结果显示，分枝杆菌 种间条带特异性的相似性系数均小于#’=，且绝大多数菌种间小于(’=。可将被试菌株鉴定 到种的水平。1045和聚类分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。 关键词：分枝杆菌， ，聚类分析，分类鉴定 123 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） , 0 ’’’!*$’ $’’’ ’(’6(*6 已报道的分枝杆菌有一百多种，其中一小部分对人与动物有致病性。非结核分枝杆 菌引起的肺部疾病，其临床表现、体征和?线影像酷似结核病，但治疗方案不同。因此菌 种分类、鉴定对于结核病的诊断、治疗和流行病学调查至关重要。 生物学特性及细胞生化试验一直是菌种鉴定的经典方法，各具特有的优点。但这些 方法操作繁杂或敏感性低，或特异性差，而且费时，有其局限性。近年来报道了一些新的 检验鉴定技术：、 探针杂交，一种快速可信的菌种鉴定方法，但只能应用于部分分枝 !./0 ［］ ! 杆菌的鉴定 。 、枝菌酸的高效液相色谱或者分枝杆菌类脂的薄层层析都能区分大部 $ ［，］ 分分枝杆菌，但需要特殊设备$, 。 、限制性片段长度多态性（ ）分析，这种分析方 , 3@:1 法只能鉴定部分分枝杆菌。 、对 基因和 热休克蛋白基因进行扩增，然后 6 !*+-./0 *(AB 对扩增产物进行酶切分析，比较酶切片段的数目和长度，从而对菌种进