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名词解释 基因：基因是一段携带功能产物（多肽，蛋白质，tRNA和rRNA和某些小分子RNA）信息的DNA片段，是控制某种性状的的遗传单位。 基因诊断：指利用现代分子生物学和分子遗传学方法，通过检测基因的结构或表达功能的异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程 基因组(genome)：指生物体的一套完整的单倍体遗传信息。 基因组学分类1. 根据研究的重点分类：结构基因组学，功能基因组学，比较基因组学 2. 根据研究对象分类：肿瘤基因组学、植物基因组学、药物基因组学、环境基因组学等 基因组学的主要研究内容 结构基因组学（structural genomics）：通过基因作图、核苷酸序列分析确定基因组成、基因定位的科学。 功能基因组学（functional genomics）：利用结构基因组学提供的信息，进行基因和非基因序列功能的研究。 比较基因组学（comparative genomics）：比较不同生物间基因和基因组结构的差异，以增进对基因功能的了解、阐明物种进化关系 2、类核：原核生物基因组DNA位于细胞的中央区，与支架蛋白和RNA结合在一起，以复合体的形式存在，经高度盘旋聚集形成一个较为致密的区域，称为类核。 3、质粒：是细菌细胞染色体以外的能独立复制并能稳定遗传的共价闭合环状DNA分子。 1. 质粒的结构 　　　 通常有三种构型:　共价闭环DNA分子 　　　　　　　　　　　 半开环DNA分子 　　　　　　　　　　 线性DNA分子 ２．质粒的理化性质：具有核酸分子的一般理化特性 如可嵌入某些染料（ EB，溴化乙锭 ） 具有较强的抗切割和抗变性的能力 4、重叠基因（overlapping gene）：病毒基因组的一段DNA序列有两个或两个以上的开放读码框架，可以编码两种或两种以上的多肽链，称为1．基因组大小相差很大2．核酸结构多样性：DNA 或 RNA，单链或双链，环状分子或线性分子3．基因组有连续的，有不连续的4. 编码序列90% 5. 基因有连续的和间断的 (有内含子) 6. 基因重叠7. 一些病毒基因组的末端具有特殊的序列结构：帽子和poly（A）尾；末端重复序列：正向、反向、LTR；粘性末端8. 多为单拷贝, 逆转录病毒除外 分段基因组是指病毒基因组由数条不同的核酸分子组成。 蛋白质与核酸间相互作用的目的在于：对基因表达进行调控。 蛋白质之间相互作用的形式：分子和亚基的聚合、蛋白分子杂交、分子识别、分子自我装配，多酶复合体 核酸分离提取的原则：1.保证核酸一级结构的完整性；2.尽量排除其他分子的污染,保证提取核酸的纯度; 重组DNA技术：是指在体外利用酶学方法将目的DNA片段与能自主复制的载体分子连接，形成重组DNA分子，然后将重组DNA导入宿主细胞中复制、扩增，从而获得单一DNA分子的大量拷贝。 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)：是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 5、载体（vector）DNA分子。DNA的纯度、反应系统、反应体积、保温时间与温度 克隆载体(cloning vector)为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。 克隆载体应具备的主要特点：至少有一个复制起点；至少有一个选择性标志；有适宜的限制性内切酶的单一切点：称为多克隆位点；应有较高的拷贝数。 常用克隆载体：质粒；噬菌体；黏粒 重组DNA应用领域：基因诊断，基因治疗，基因工程药物，基因敲出和转基因技术 体外基因扩增技术常用策略： 靶基因扩增系统：聚合酶链反应（PCR） 转录依赖的扩增系统（TAS） 链替代扩增（SDA） 2.探针扩增系统：连接酶链反应（LCR） Qβ复制酶（QβR）体系 3.信号放大系统：分支DNA（bDNA） 杂交捕获系统 （一）PCR反应体系 1. 模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。 DNA模板：质粒DNA 10ng；基因组1000ng。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。 2. 引物 引物长度： 18-40 nt 碱基：G+C含量: 40-60%，碱基分布的随机性 引物自身：防止发夹样结构 引物之间：防止二聚体 引物的3’端：严格要求配对 引物的5’端：可被修饰 引物的特异性： 3. 耐热DNA聚合酶 4.脱氧核苷三磷酸（dNTP） 5. 缓冲液 PCR衍生技术：原位PCR；逆转录PCR；反向PCR；多重PCR ；标记PCR；巢式PCR；任意