果蝇中Ecp蛋白的表达、纯化和抗体制备.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( * # 年 月 $%%# !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-. $%%# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 果蝇中!# 蛋白的表达、纯化与抗体制备 汪道涌 刘 莉 谢 维 （东南大学遗传与发育生物学系，遗传学研究中心，南京 $!%%% ） 摘 要 获得特异性抗 多克隆抗体，为进一步研究 的功能奠定基础。利用特异引物，通过 扩增出 7@B %03 C3/DEC 编码 蛋白的全长 ，克隆至谷胱甘肽 转移酶融合蛋白表达载体 （ ） 中，转染大肠杆菌 7@B @F+G H BI7J/13/! K9= 5E FK ，经诱导表达后，利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白，经凝血酶裂解，释放出7@B 蛋白，再 ! 经 亲和层析，最终获得高纯度的 蛋白。用纯化的 蛋白免疫新西兰家兔，亲和层析纯化抗 抗体。 +9/+3G 7@B 7@B 7@B 利用该抗体进行的 结果表明： 蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组 L4=M4NA O)(M 7@B 织中均有明显表达，提示 %03 可能是一个重要的管家基因。 关键词 %03 ，克隆，表达，抗体制备，黑腹果蝇 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） P6! G !%%%/#%5! $%%# %#/%$!/%# 我们从野生型黑腹果蝇胚胎@F+G 文库中筛选 $ % $ % 菌株和质粒：宿主菌 7 * 0(,# FK 、质粒 ! 得到一个新的未知功能基因，命名为 （ （ ） 由本室保存。 %03 4QR E @(A/ BI7J/13/! K9= 5 E M-9A9AS BN(M49A， 登陆号： ）。该基因 $ % $ % ’ 试剂和工具酶类：本实验中所使用的限制 I4AO-AT GR#$$ 酶、 、 连接酶、 扩增试剂盒等均为 @F+G 全长!6$UB，含有一个!$5UB 的开放阅读框， F+-=4 Q F+G DEC 公司产品，凝血酶、 为 公司产品， 编码 个氨基酸的蛋白质。 结果表明：