细胞芯片捕获恶性胸水中癌细胞临床应用价值.pdfVIP

94 南昌大学学报 (医学版)2010年第 5O卷第 12期 JournalofNanchangUniversiw(MedicalScience)2O10，Vo1．50No．12 细胞芯片捕获恶性胸水 中癌细胞 的临床应用价值 刘翼军 ，王春福 (江西省胸科 医院a．病理科 ；b．肿瘤科 ，南昌 330006) 摘要 ：目的 探讨抗体细胞芯片自动捕扶恶性胸水中癌细胞的临床应用价值。方法 应用抗体细胞芯片技术对 良、恶性胸水(各 4o例)进行免疫杂交 。结果 8O例胸水细胞芯片阳性免疫杂交点细胞 形分布 ，细胞形态完 整 ，结构清晰 ，杂交点以外无非特异性结合细胞 。其中 4O例恶性胸水 阳性杂交点为 ：j：皮特异性抗原 37例 、广谱 CK39例 、CD44V636例、CD6828例 ；另 40例 良 ：朐水细胞杂交点 ：CD44V65例见少量淋 巴细胞 。另 6种 CD系 列抗体免疫杂交点仅捕获癌性胸水和 良性胸水 中的淋 巴细胞 、多核 巨细胞 ，未见捕获癌细胞 。结论 细胞芯片捕 获技术对胸水 中恶性肿瘤细胞 的诊断与鉴别诊 断具有重要 的临床应用价值 。 关键词 ：细胞芯片；捕获；免疫杂交 ；癌细胞；胸水 中图分类号：R392．1 文献标志码 ：A 文章编号 ：1000—2294(2010)12—0094—03 细胞芯片是在 CDNA微阵列基础 』二发 明的一 3．5em×2．5cm×0．8cm大小的空白蜡块 ，待石蜡 种特殊牛物芯片，具有体积小 、信息量大、高通量、自 稍微冷却 ，设计 8×5细胞芯片微阵列，用打孔机将 动识别及 町比性强的优点 ；能高效 、快速和低消耗的 受体蜡块进行打孑L，每孔直径约 2mm。将蜡块冷 进行细胞及组织学 的各种研究与观察 。。肿瘤标 冻后 ，进行切片 ，每片 10 n-i，裱于玻片上。制成微阵 志物是对肿瘤进行诊断、分级 、预后、检测治疗反应 列玻片。②点样 ：每种抗体与 pH 10．2的Tris—HC1 所必需的，对肿瘤细胞的诊 断尤为重要。本研究采 缓冲液等体积稀释。抗体芯片按上述 10种抗体 ，每 用细胞 卷片技术制作 8O例胸水细胞芯片 ，同时采用 4孑L1种抗体依次排列进行点样 ，将 10种抗体分别 抗体与细胞抗原特异性结合 的方法，通过 自动捕获 点在各 自的区域 内，形成 8×5微阵列 。点样后将芷： 将所获得的细胞 旧定在 特定 区域 ，对胸水中肿瘤细 片玻片置于湿盒 中，4℃冰箱水化 、过夜 。 胞进行诊断和鉴别诊断。 1．3．2 封 闭 用 2．5 酪蛋 白PBS溶液室温下封闭芯片 1h， l 材料与方法 封闭抗体外 的非特异性结合区，PBS冲洗 2次。 1．1 标本来源 1．3．3 杂交 收集 2006年 ]月至 2010年 6月江西省胸科医 取 EDTA—K冲洗标本细胞3次 ，每次 3min，使 院门诊及住 院患者 8O例 ，均经支气管镜病理组织活 细胞膜抗原充分暴露 ，调整细胞浓度为 lO。I 、制 检、细胞学涂片证实。其中男 55例 ，女 25例 ，年龄 成细胞悬液 ，将细胞悬液直接滴在芯片上孵育 1h， 26～78岁。良、恶性胸水各 4O例 。 使细胞与特异性抗体充分结合 ，PBS冲洗 3次 ，每次 】．2 主要试剂 3min。109／6甲醛固定细胞 30min。 上皮特异性抗原 (ESA)、广谱 CK、CI)44V6、T 1．3．4 染色 细胞 (CI)3、CD45RO)、B细胞 (CD20、CD79oc)、霍奇