细胞化学染色.docVIP

细 胞 化 学 染 色 ????细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下, 运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。因而对于探索细胞内的化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要意义。 ????血液细胞化学染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基酸、酶 )、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类, 采用的方法通常为化学结合和物理溶解及酶-底物反应。 临床评价 : 1. 细胞化学染色的开展 ,已有数十年的历史。其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊，对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助，对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。 2. 血液系统各种恶性疾病，特别是急性白血病，因其多为早期分化较差的病理细胞增殖, 客观上存在着形态变异、畸形发育，即使是有经验的检验人员仅凭细胞形态也难以避免错误诊断的发生。如将细胞形态和细胞化学染色相结合， 能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型，即为急性白血病FAB分型。 3. 近年来，由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展，进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展，并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段，对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合，对各种白血病进行分型，即成为白血病的MICM分型诊断。 4. 细胞化学染色通常应用在各种血液系统疾病特别是对各种急性白血病的诊断与鉴别诊断中。但白血病细胞因其呈高度的异质性和多态性，有时即使是同一类型的白血病也可在细胞形态、细胞化学染色结果、细胞免疫表型及分子生物学等方面存在较大的差异。所以对各类型白血病作一套较完整的细胞化学是补充了单凭形态对细胞辨认的不足。因此我们在实际工作中若要对各类型白血病作出比较准确的诊断与鉴别诊断，应尽可能采用多项细胞化学染色或双（多）重染色。 ????细胞化学染色方法分门别类有许多种，结果的显示也不尽相同，有时即使检测同一物质，因采用的方法不同其结果有可能存在一定的偏差，会造成科室间（甚至同科室不同操作人员间）对同一份标本作出不同的诊断。所以我们应注意选择结果稳定、操作简便（操作步骤越多，出现的误差几率就越大）、阳性显示明显的方法或标准试剂盒。如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的作用。 ? 一 过氧化物酶染色 peroxidase ,(POX) 原理： ????在血液和骨髓细胞中，粒细胞系和单核细胞系的嗜苯氨蓝颗粒 (A颗粒)内的溶酶体中存在有过氧化物酶（POX）。通过此酶氧化过氧化氢，释放出单原子氧，后者氧化3-3二氨基联苯胺，使之变成棕黑色颗粒状沉淀物，定位于酶活力所在处。由于各种细胞内过氧化物酶（POX）的活力不同，其颗粒大小与色泽深浅也有所不等。此酶的活性与溶酶体的数量有关，而与嗜苯氨蓝颗粒（A）颗粒的多少无关。淋巴细胞质嗜苯氨蓝颗粒中不存在溶酶体，所以过氧化物酶染色呈阴性反应，正常人群中性粒细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞呈阳性反应。淋巴细胞、巨核细胞、红细胞、浆细胞等均呈阴性反应。 正常细胞反应: 1. 粒细胞系---各阶段中性粒细胞（少数原粒除外）可呈颗粒状阳性或强阳性。定位于胞质内。嗜酸性粒细胞可呈均匀粗大颗粒状阳性。定位于胞质内。 2. 单核细胞系-成熟单核和幼稚单核及部分原始单核(分化较好)可呈弥散细颗粒状阳性, 定位于胞质内。 3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。 病理变化： 1.酶活性增高可见于再生障碍性贫血、急性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、放射病、嗜碱粒细胞在慢性粒细胞性白血病时可出现阳性。 2. 酶活性减低可见于某些肿瘤、MDS、链球菌感染、风湿热等。 3. 酶活性缺乏可见于： a.(MPO)髓过氧化物酶缺乏引起中性粒细胞和单核细胞POX呈阴性,仅在涂片中见少数早幼粒细胞呈弱阳性反应。 b.乳过氧化物酶缺乏引起的嗜酸粒细胞POX呈阴性。 临床评价: 1. 通常将其染色阳性率3%作为淋与非淋的分界标准。但需注意在淋巴细胞白血病时原始粒和单核细胞有时也会超过3%, 此时应慎重考虑, 结合形态反复观察。 2. 若POX染色阳性且强度较高可结合细胞化学染色、细胞免疫表型检测, 遗传学和分子生物学检测对各种急性髓性白血病进行分型或亚型间的区别, 特别有助于M1与M5a、M2b与M3b及M4型亚型的鉴别。 3. 若POX染色呈阴性反应, 必须结合其它细胞化学染色、细胞免疫表型, 遗传学和分子生物学, 来加以区分出淋巴系、非淋巴系、双表型、干细胞型等恶