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第45 卷 第 8 期 2000 年4 月 简 报 离体茎段嫁接体内IAA 的免疫组织化学定位 卢善发 ( 中国科学院植物研究所, 北京 100093. Email: lsh@public2.east.cn.net) 摘要 利用免疫组织化学技术对黄瓜离体茎段嫁接体内吲哚乙酸(IAA)的动态变化进行定位研究. 结果表明冰冻干燥-气体固定法较溶液化学固定法固定 IAA 的效率高. 培养基中不含激素时, 嫁 接体组织中银颗粒标记较少, 嫁接体发育过程中IAA 的动态变化不明显. 培养基中含适当激素时, 银颗粒标记较多, 其数量的变化与嫁接体发育密切相关. 对激素定位研究方法及IAA 在嫁接体发 育过程中的作用进行了讨论. 关键词 离体茎段嫁接 生长素 免疫组织化学定位 黄瓜 嫁接是一项在农业生产和基础理论研究中广泛应用的技术. 嫁接体发育是异种植物或同 种植物的器官 组织或细胞相互影响 相互作用结合成为一个有机整体的过程. 对这一过程 [1] 开展深入细致的研究, 不仅有重要的理论意义, 还具广泛的应用前景. 为此我们在前人 工作 [2,3] 的基础上, 建立了试管苗离体茎段嫁接系统 , 分析了嫁接体发育期接合部及嫁接体各部分 [4] 激素水平的动态变化 . 为进一步阐明激素的作用机理, 开展接合部激素分布及其动态变化研 究十分必要, 然而至今未见相关报道, 主要原因是缺乏准确和灵敏的定位手段. 由于植物激素是一些小分子物质, 制备切片时容易流失或移位, 给定位研究带来很大困 难. 目前普遍采用的溶液化学固定法 低温置换化学固定法等都难以避免上述问题, 因此近 [5,6] 来有人提出冰冻干燥-气体固定法 , 该法的建立将为解决定位研究中激素流失或移位问题提 供有效途径. 本文在建立较为完善的冰冻干燥-气体固定法的基础上, 对嫁接体发育期接合部 生长素进行免疫组织化学定位研究, 为阐明嫁接体发育机理提供理论依据. 1 材料与方法 实验材料为长春密刺黄瓜. 种子剥去种皮后常规消毒, 接种于不含激素的 MS 培养基中. 在光强约 100 mol m-2 s- 1, 每天光照24 h 和温度(28 2) 的条件下培养5 d. 无菌条件下, 取 6~7 cm 高的植株, 切取子叶下 0.5~3.0 cm 之间的下胚轴, 从中间横切为两段后嫁接, 套上塑 料管, 放入培养基中培养. 采用MS 培养基 + 2 蔗糖 + 1.4 琼脂. 处理接穗培养基中加IAA 1.0 mg L- 1 和ZT 0.25 mg L- 1, 砧木培养基中加ZT 0.25 mg L- 1. 对照接穗和砧木培养基中 [3] 不加激素 . 嫁接后3, 6, 9 和 15 d 切取嫁接接合部. 在液氮中急速冻结后, 置-30 下冰冻真空干燥约 48 h. 材料在真空状态下恢复至室温后, 用多聚甲醛和戊二醛蒸气固