口虾蛄乙酸乙酯提取物分离及体外抗肿瘤活性研究.pdfVIP

第25卷第2期 长春中医药大学学报 V01．25 of ChineseMedicine 4，2009 2009年4月 Joumal ofTraditional ChangchunUniversity 口虾蛄乙酸乙酯提取物分离及体夕卜抗肿瘤活性研究 冯承恩1，吕应年2，叶才果3，王槐高3，黄培春3。 (1．广东药学院，广东广州519020；2．广东省天然药物开发研究重点实验室，广东湛江524023； 3．广东医学院病理生理学教研室，广东湛江524023) 摘要：目的分离口虾蛄乙酸乙酯提取物并对其组分进行体外抗肿瘤生物活性追踪。方法采用MrITI’比 色法，细胞集落形成实验及生长曲线测定对分离得到的提取物进行抗癌生物活性筛选。结果M，rI’法发现乙酸 示成分E对HO．8910PM细胞生长有显著抑制作用，且有明显的时效一量效关系。结论口虾蛄乙酸乙酯提取物 中的组分E能明显抑制肿瘤细胞生长。 关键词：口虾蛄；乙酸乙酯提取物；抗肿瘤；活性成分 中图分类号：R285．5 文献标志码iA 海洋是地球上资源最丰富的领域，而海洋生物 渍5d，重复3次。所得提取液旋转蒸发得到乙醇粗 物种的生态环境复杂，比陆生生物恶劣，产生并积累 提取物。乙醇粗提取物与硅藻土混合，石油醚Ⅱ、乙 了大量特殊化学结构、具有生物活性的物质…I。13虾 酸乙酯系统溶剂法分离，分别得到石油醚提取物、乙 oratoria)又称濑尿虾，属于节肢动物门，在酸乙酯提取物。对乙酸乙酯提取物经硅胶柱层析分 蛄(Squilla 湛江海域广泛分布。近年来，本研究室对口虾蛄提取 离得到A，B，C，D，E5种组分，展开剂为氯仿：乙酸乙 物进行抗鼻咽癌和抗EB病毒筛选，发现了其乙醇及 酯：甲醇-水(108：2：0．5)。抗肿瘤生物活性跟踪的 乙酸乙酯提取物对鼻咽癌细胞生长抑制作用最为显 方法，E组分经展开剂正丁醇：冰醋酸：水(4：1：5)，硅 著[2圳。在此基础上，笔者对乙醇提取物作进一步的 胶柱层析洗脱后得到两个组分。 分离工作，并对其乙酸乙酯分离物的抗肿瘤活性进行 2．2药物抗肿瘤活性组分的筛选 追踪研究。 2．2．1 1实验材料 浓度接种于96孔培养板。贴壁后吸去培养液，加入 1．1药物 口虾蛄乙酸乙酯提取物(由广东药学院 不同浓度的药物，空白对照组加入等量的培养液、阳 实验室自行制备) 性对照组加入40 h后 1．2细胞培养人卵巢癌低分化细胞株HO．8910PM37℃培养24h后，加20础rr，37℃继续培养4 (为广东医学院生物化学教研室液氮保存)，实验前复 弃去培养液，每孔加150止DMSO，振荡器振荡后，酶 苏培养(含10％新生牛血清，双抗，RPMll640培养液标仪上实验波长570nln，参比波长630胁测定各孔 吸光度OD值，计算生长抑制率。生长抑制率m(％) 中)，置于5％c02培养箱内，恒温37。(2，c02浓度控制 在5％。取对数生长期、生长良好的细胞(台盼蓝染 色计数，活细胞率≥95％)用于试验。 2．2．2集落形成实验以200个细胞浓度接种于75 l。3仪器及试剂RE52CS．2旋转蒸发器，SHB一Ⅲ循 mL培养板。贴壁后吸去培养液，药物组加入不同浓 环水式多用真空泵，倒置显微镜，METILERAE240电度药物，空白对照组加入等量的培养液、阳性对照组 子分析天平，96孔塑料培养板，ELx800全自动酶标 加入40