呼吸道病原体检测方法的研究进展.pdfVIP

医学检验与临床 20 10年第21卷第4期 Me地a l La bomt or y s ci 。! e 叫C_a l i l l J e51201 0_ 。V012 1．No ．4 ·95 · 也堕! ! 鱼 ：! 丝! 尘 ：塑呈 ：! 鱼! ! 二塑! !：垫! Q：丝 ：堕!I 呼吸道病原体检测方法的研究进展 王 涛1 郭 坤2 牛家峰2 李 庆2 1( 淄博市第一医院儿科，山东淄博255200) 2( 淄博市第一医院检验科 ，山东淄博255200) 呼吸道感染是I 临床最常见的疾病之一 ．可由多种病原体 病毒分离法：取鼻咽分泌物接种Hep一2和MDCK细胞， 引起，其 中包括细菌，病 毒，支原体，衣 原体等，其临床 表现与 在培养基 中生长，连续观察细胞的变化，如有特征性病变出 治疗措施存在差异。最常见包括呼吸道合胞病毒( R V) 型、 现者，确定为阳性 ；若盲传3代 ，如仍无病变出现 ，确定为 阴 腺病毒( AV3) 型、流感病毒A( I V—A) 、流感病毒B( Ⅳ一B) 、 性 。该法特异性较强，但其消耗时间长，一般需1、2周才能 副流感病毒l ( PⅣ1) 、副流感病毒2 ( PW2) 、副流感病毒3 观察到病变，且成本较高 ，分离阳性率也较低。 ( PI v3) 、肺炎支原体( 艘) 、肺炎衣原体( cP) 、流感嗜血杆菌 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法( APAAP) ：吸取鼻 ( HI) 、肺炎克雷伯杆菌(KP) 、嗜肺军团菌血清型一1( LP 一 1) 咽深部或下方的分泌物，用特异性的单克隆抗体( McAb) 来测 等 。近年来，新的致病性病原体还在不断地被发现，如高致 定鼻咽部分泌物脱落细胞 中的未知抗原，制片后在普通光学 病性禽流感病毒、 AR 病毒、 甲型HI Nl 流感病毒以及人类 显微镜下观察 。此方法所用设备简单，快速，特异性强 、在普 偏肺病毒等的流行性感染．检测方法也在不断的进步，给I | 缶 通的光学显微镜下容易辨认 。 床疾病诊断和治疗提供极大帮助。本文将对呼吸道病原体 直接免疫荧光法：将荧光素标记在根应的抗体上，直接 检测方法的研究进展进行综述 。 与相应 的抗原反应 ，是一种快速而准确的方法 ．本法与 以往 采用的间接荧光免疫法不 同的地方在于，它减少了间接法中 l 、呼吸道病原体的检测方法 【l - 5] 二抗 的非特异性反应，从而提高其特异性，检测时间较短．标 1．1血清特异性抗体的检测 本在送到实验室2h 内就可得出结果，而设备仅需荧光显微 酶联免疫吸附法( ELI A) ：一部分抗原或抗体包被到某 镜 。为尽早诊断疾病 ．减少疾病传播以及确定正确的治疗方 种 固相载体表面，将另一部分抗原或抗体与某种酶连接成酶 案提供了更可靠 的依据 。 标抗原或抗体．这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又 1．3病原体的分子生物学检测 保留酶的活性。在测定时，把受检标本( 测定其中的抗体或 聚合酶链反应( PCR) ，是近年来广泛用于临床病原体检 抗原) 和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗 测的一种有效手段 ，此方法的最大优点是敏感 、特异、快速 ． 原或抗体起反应，用洗涤的方 法使固相载体上形成的抗原 可使某些不能培养或难 以培养的病毒得以检测 【6J 。尤其是 抗体复合物与其他游离物质分开，最后结合在 固相载体上的 与相关技术合并后其功能更为强大，准确性，灵敏度和特异 酶量与标本中受检物质的量成 一定的比例。加入酶反应的 性大为增强。其中多重PCR可同时检测多种病毒病原体，实 底物后，底物被酶催化变为有色产物 ，产物 的量与标本 中受