复方中草药对凡纳滨对虾热应激蛋白7O基因表达的影响.pdfVIP

14 广西水产科技 复方中草药对凡纳滨对虾热应激蛋 白 7O基因表达的影响 雷爱莹 曾地刚 (广西水产研究所 530021) 摘 要 为了研究复方中草药对凡纳滨对虾热应激蛋白70基因mRNA表达的影响，试验凡 纳滨对虾随机分为2组，第 1组喂食基础饵料辅以1％的复方中草药，第2组喂食基础饵料作为对 照。采用逆转录聚合酶链反应 (RT·PCR)对 2组凡纳滨对虾的肝组织进行 HSP70基 因的mRNA 表达检测，并以18SrRNA为内参照进行基因表达水平的半定量分析，结果显示第1组的凡纳滨对 虾的肝组织HSP70基因的mRNA的表达显著高于第2组 (P0．05)，说明复方中草药可提高凡纳 滨对虾HsP70基因mRNA的表达量。 关键词 复方中草药 凡纳滨对虾 热应激蛋白 基因 凡纳滨对虾亦称南美白对虾，原产于 用 引。 中、南太平洋沿岸水域秘鲁北部至墨西哥桑 本文通过研究复方中草药对凡纳滨对虾 诺拉一带，以厄瓜多尔沿岸的分布最为集 HSP70基因表达的影响，以探讨在凡纳滨对 中，是集约化高产养殖的优 良品种 J。凡 虾饲料中添加复方中草药的生理功效。 纳 滨 对 虾以其壳薄体肥、肉质鲜嫩、生长 1 材料与方法 迅速、群体增长均匀、抗病力强等优点，逐 渐成为国内外主要养殖虾种之一，深受国内 1．1 实验动物 外市场的青昧 J。 实验凡纳滨对虾 2O尾，平均体重 热应激蛋白 (HeatStressProtein，HSP) 5．2g，来 自广西水产研究所SPF南美白对虾 是普遍存在于原核生物和真核生物中的一类 良种场。 蛋白质，是生物在应激条件下生产的一种非 1．2 药物与试剂 特异性、能增强机体对高低温、创伤、细菌 1．2．1 药物 和病毒感染等适应能力的防御性产物。HSP 复方中草药的主要成份是蜈蚣藻、马齿 的主要生理功能是促进与维持新生多肽链的 苋、千金藤和党参。 正确折叠，并且调节细胞的生长、分裂、分 1．2．2 试剂 化、死亡，也参与细胞的抗损伤、修复和热 RT—PCR试剂盒购 自上海生物工程公 肘受过程，并在多种疾病过程中有重要作 司，TrizolRNA抽提试剂购 自北京博大泰克 ·基金项 目：广西科学基金项 目 (桂科青0542026)资助。 广西水产科技 l5 生物基因技术有限责任公司，引物由赛百盛 3 ． 生物工程公司合成。 1．5．2 反应体 系 1．3 动物分组及饲养 采用50ul的RT．PCR反应体系，其中包 20尾凡纳滨对虾随机分为复方中草药 含 ：AMV／Tn5×ReactionBufferl0ul，dNTPs 组 (第 1组)和对照组 (第2组)2组，每 Mix(10mM eachdNTP)lul，25nMMgSO4 组 1O尾。复方中草药组凡纳滨对虾的饲料 2ul，AMV ReverseTranseriptase (5u／u1) 中按照 1％的浓度添加复方中草药，进行饲 lul，TflDNAPolymerase (5u／u1)1ul，RNA 喂。对照组的饲料不添加复