异氟醚预处理对幼兔缺血再灌注损伤心肌MDA、SOD及ICAM-1mRNA的影响.pdfVIP

山东医药2010年第5Q 筮51期 · 基础研 究 · 异氟醚预处理对幼兔缺血再灌注损伤心肌 MDA、SOD及 ICAM—lmRNA的影响 刘国利 ，沈 途 ，张海燕 。张锦英 (1辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州 121001；2荣成市中医院) 摘要：目的 观察异氟醚对幼兔缺血再灌注(I／R)损伤心肌的保护作用及机制。方法 取纯种新西兰幼兔36 只，将其随机分为3组各 l2只，模型组及观察组均制备I／R模型，观察组在缺血前吸入 1．1％异氟醚30rain、洗脱 15min；假手术组处理方法同模型制备，但冠状动脉左前降支只穿线不结扎，麻醉维持 150rain。实验结束后取心肌 组织，以硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)水平，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，半定量 RT- PCR法检测细胞黏附因子 1(ICAM-1)mRNA表达。结果 观察组和模型组心肌组织中MDA及ICAM一1mRNA均 显著高于对照组，SOD显著低于对照组，尤以观察组为著(P均0．05)。结论 异氟醚预处理对幼兔心肌 I／R损 伤具有保护作用，可能机制为降低心肌MDA及 ICAM-1mRNA水平、提高SOD活性。 关键词 ：异氟醚 ；缺血再灌注；幼兔；心肌 中图分类号 ：R614．2 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2010)51-0023-02 研究显示，异氟醚预处理具有早期相及延迟相 术组处理方法同模型制备，但冠状动脉左前降支只 心肌保护效应 ¨J。随d,JL心脏外科的发展，未成 穿线不结扎，麻醉维持 150rain。 熟心肌的保护已成为当前心肌保护的研究热点。 1．3 心肌组织中相关指标测定 ①MDA、SOD：实 2010年5月，我们观察了异氟醚预处理对缺血再灌 验结束后处死幼兔，取心肌组织匀浆，以硫代巴比妥 注(I／R)损伤心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物 酸法测定MDA水平 ，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活 歧化酶 (SOD)及细胞间黏附分子一1(ICAM—1)水平 性，具体操作按照试剂盒说明书进行。② ICAM—l 的影响。现报告如下。 mRNA表达：再灌注 120min后快速取左心室前壁 1 材料与方法 部分组织约 100mg放人液氮中。提取心肌组织中 1．1 材料 纯种新西兰幼兔36只，雌雄不拘，体质 RNA，逆转录合成 eDNA，mRNA在 TaqDNA聚合酶 量220～280g，兔龄 14～21d(相当于人3～6岁)； 催化下进行PCR扩增。所用引物及扩增片段长度： 异氟醚(雅培制药有限公司，上海)，MDA、SOD试剂 一 aetin上游引物为 5一CG111GACA1℃CGTA从 GAC． 盒(南京建成生物工程研究所)，RT—PCR试剂盒 3，下游引物为 5一CTCGAAGGTGGACAG1．GAG_3， (JACKSON公司)，其他均为国产试剂。 扩增片段202bp；ICAM一1上游引物为5一AAGGTGT- 1．2 动物分组及处理 将 36只幼兔随机分成三组 GATATCCGGTAGA-3，下游 引物为 5-CCTrCTA— 各12只，其中模型组及观察组均按下列方法制备I／， AGTGGTrGGAACA-3，扩增片段 590bp。循环参 R模型：腹腔注射 l％戊巴比妥钠50mg／kg，取仰卧 数：94℃4rain，94℃50s，55℃30s，72℃90s，72 位固定四肢，连接皮下 电极连续监测标准 Ⅱ导联心 ℃ 10min，共 35个循环。将PCR产物在琼脂糖凝 电图，颈部正中分离气管并切开插管用动物呼吸机 胶中进行电泳然后置于凝胶图像分析系统进行吸光 进行机械通气，分离颈动脉置管连接换能器测压；正 度扫描，以管家基因B—actin作为内参照校正，用 目 中劈开胸骨，切开心包，缝线绕过左冠状动脉前降支