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47卷3期 微 生 物 学 报 47(3)：533～536 2007年6月4日 Ac细朋蚀rD西如如g话n跏缸n 4June2007 曲霉菌的RAPD分析及其在酿造工业中的应用 潘 力，王 斌。，郭 勇 (华南理工大学生物科学与工程学院 广州 510640) 株曲霉菌进行系统发育分析。通过改进提取方法，获得了质量较好的模板DNA，凝胶电泳结果和分光光度法检测 结果表明其适合用于进一步的RAPD—PcR试验。从9个待选引物中筛选到3个扩增产物谱带多、特征好、覆盖面广 条，各试验菌株主带4—9条，次带丰富。由此构建的系统进化树较好地吻合了传统的形态分类学，证实了RAPD分 子标记技术在此类微生物系统发育分析中应用的可行性，也为酿造工业中检出产黄曲霉毒素的污染菌株提供了理 论基础。 关键词：曲霉菌；RAPD；系统发育分析；黄曲霉毒素 中图分类号：Q78。Q935文献标识码：A 文章编号：O001—6209(2007)03．0533—04 曲霉菌中的一些类群在酿造工业上具有重要应用，如米 曲霉具有较强的蛋白质分解能力，同时也具有糖化活力，很 生物研究所(GIM)等单位，如表1所示。其中一些菌株可产 早就被用于酱油和酱类生产上；黄曲霉产液化型淀粉酶的能 黄曲霉毒素，在酿造行业中已被弃用(表1)，但它们仍时常成 力强，蛋白质分解能力仅次于米曲霉，并且它能分鬃DNA产 为酿造工业生产的污染菌株。 生核苷酸，应用广泛；酱油曲霉则主要应用于酱油酿造行业。 这些具有重要应用价值的曲霉菌多属于黄曲霉菌群 表1试验菌株 (A即喇髓w．，zwmG删p)，鉴于它们在酿造工业上的重要应 Tablel 7neb踮icin胁nadon0fthetestst】越ns 用，对其进行分类研究就显得十分重要。另一方面，酿造工 业生产中常污染一些产黄曲霉毒素的菌株(多为黄曲霉)，严 重危害酿造行业的生产安全性。因此加强此类曲霉菌的分 类研究，对产毒菌株加以区别、鉴定，是十分必要的。 RAPD(RandomAm一击ed PolymorphicDNA)分子标记，即随 机扩增多态性DNA，是由williⅢs和welsh等1990年建立的 一种有效的分子标记技术…，现已广泛应用于动植物及微生 物的遗传多样性分析、物种亲源关系分析、种群分类和基因 组研究等领域幢“o，但其在曲霉菌分类研究中的应用还不多 见。本文应用RAPD分子标记技术对16株曲霉菌进行分类 分析，考察RAPD分子标记技术在此类真菌分类中应用的可 行性，为其在真菌分类中的应用积累经验。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1菌株：16株试验菌株包括米曲霉5株、黄曲霉6株、酱 Thestrainsw汕。couId anatoxint|Ieirmetabolism pmduce d耐ng 油曲霉5株，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心 基金项目：广东省自然科学基金；广东省科技攻关项目(200482020lOll) ’通讯作者。Tel：86—20-8711384l；Fa】【：86—20E—mn：wangbinl981062I@163．com scut．edu．cn 收稿日期：2006．08．30；接受日期：2006—09—29；修回日期：2006—11．25 万方数据 534 PANb 1．1．2 试剂和仪器：PcR试剂盒、RNase、DNA分子量标准(x一用的基因组DNA的提取方法，主要是针对丝状真菌细胞壁 踟T14I Digest)购自TaKaRa公司，其他常规试剂为国产分析的结构特点进行了改进。由于试验菌株均属于曲霉属，因此 纯试剂。德国Eppendorf公司BioPhofomete