高效植物DNA提取方法.pdfVIP

维普资讯 7一年f ．舛曙㈠ 生物技术 4(3)；39—4l，1994 Biotechnology 高效的植物 DNA提取方法 ． 奎重星 ．重塑 卢，翠华 钱 华 吕云波 (黑龙江省农业科学院生物技术研究中心，暗尔摈 f f 利用液氮研磨植物幼芽，以苯酚一氯仿一异戊醇一核糖核酸酶法提取 大豆、莱 豆、玉米、高梁等几种农作物的总DNA。所提取的DNA经岛津uV，265紫外分光光度 计检测及 0．6 的琼脂糖凝腔电泳 ，结果证 明：该方法所提取 的植物总 Ⅸ A纯度高． 片段长度整齐 ，约 5Okb左右 ，符合外源 DNA导入作物 的要求 ，并且 DNA收率很高 近几 3．加等体积苯酚一氯仿一异戊醇 (25 直接导入农作物在多种作物上得到了广泛的 24：1)，摇匀 ，400Of／rain离 5-5分钟 ．吸出 应用[1’ ．我们从事外源 DNA直接导入大 水相。 豆研 究已多年 ，该项技术要求 DNA纯度为 4．加 等 体 积 氯仿～异 戊 醇 、摇 匀． A260／A2~012．0，A260／A280≥1．8，表 明蛋 400ar／vain离心 5分钟 ，吸水相 。 白质含量符合分子育种要求 ，片段长度应达 5．约 2倍体积 的预 冷无 水 乙醇 沉淀 50kb左右 ，浓度约为 500ug／rnl。从 1992年开 DNA，用玻璃棒绕出或离心沉降．得到 DNA 始．我们叉对导入大豆 已稳定遗传的转 化后 粗制品，略凉干 。 代进行了 RAPD分子验证研究 所有这些工 6．用 0．1×SSC将 沉淀的 DNA溶解后 ， 作都必须要求提取高纯度和片段大小整齐适 加 1／10体积的 10×SSC，使其最终浓度达 1 宜 的植物 DNA。 ×SSC，加 RNaseA．使酶 的晟终浓度达 50～ 本文将报道利用苯酚一氯仿一异戊醇一 75峙／Inlrs]，37℃水浴保温 40分钟 核糖核酸酶法提取几种植物DNA的结果。 7．重复 2．、3．、4．程序 。 8．加 2．5倍体积的预冷无水 乙醇沉淀 材料和方法 DNA，离心 DNA沉降．弃去上清藏 ，略凉干 ． (一)实验用植物材料 得到精制DNA。 大豆 菜豆、玉米和高梁等 4种怍物共约 9．用 0．1×SSC溶解后 ，加 1110体积 的 30份试材 。 10×SSC。 (二)DNA提取方法 然后用岛津 uV一265检测所提取的DNA 1．取暗发芽的植物幼芽 30g．在液氯预 纯度及收率 ．用 0．6 的琼脂糖凝胶 电泳检 冷 的研钵 中与液氯混 台研磨成粉柬状 ，加 测其片段长度是否整齐一致 30ml提取缓冲液 3．65℃水浴 3O分钟 ．冰浴