23.重组 A.pptVIP

第二十三章 重组和转座 （1）同源重组 (homologous recombination )或 普遍性重组（generalized recombination ） A.交互重组 B.单向重组 （2）位点特异性重组(site-specific recombination) （3）转座重组 （4）模板选择（copy choce） （5）特殊重组。 （6）同源特异重组 第一节 重组机制 一.交叉理论（chiasmatatype hypothesis） 1909年Janssens并提出了交叉型理论 二.断裂和重接模型 1937年Darlington提出 三.模板选择学说（copy choice ） Belling J.首先提出的，1933年他又撤回了 这一假设。 四 .1948年Hershey提出模板选择学说 断裂重接模型和模板选择复制模型的否定 断裂重接模型不能解释基因转变和极化子现象 模板选择复制模型存在的问题： (1) 违背了半保留复制； (2) DNA复制应在S期，重组应在偶线期， 不应同时发生。 (3)不能解释3线和4线交换。 否定模板选择复制模型的试验 第二节 Holliday 模型 1930年Winkler把真菌中不规则分离现象解释为基因转变（conversion） Lindegren,C.C（1949）报道了酵母有规律的异离常分离现象：交配型A×a的杂交中，有些子囊所含的孢子为（3A+1a），也称为基因转变。 50年代中期Mitchell,M. B. 异常分离不是由于整个染色体的异常行为，而是由于特定位点的“基因转变”所致，即属于基因内重组。 Olive, E1-Ani和Kitani等在粪壳菌（Sodaria fimicola）中也发现了异常分离。认为这种异常分离是有丝分裂的产物，称为减数后分离（postmeiotic segreation） 极化子（polaron）同一基因内部的各个突变位点的转变频率常从基因的一端向另一端逐步递减，具有这种现象的一段DNA称为，一个极化子相当于一个基因（Rizet等1961）。 基因重组的模型都必须解释异源双链的形成以及基因转变往往伴随着两侧基因重组这一现象。1964年美国学者Robin Holliday提出了著名的Holiday模型（图23-8） 极化子是由于交换产生的错配只发生在异源双链部分，而此部分只发生在Hollidy 结构的断裂和分枝点之间，离断裂点越远的基因座位离分枝点可能越远，而不在异源双链的部分。 第三节 双链断裂起始重组 联会复合体 酵母中重组的分子事件和细胞学事件的相关性 双链断裂模型 Spo11共价连接到双链断裂的5’端 第四节 重组和酶 在原核同源重组中 存在8个碱基组成的Chi位点; RecA.B.C.D.参与重组。 RecBCD复合体具有核酸酶，解旋酶和ATPase活性。在Chi位点产生单链3ˊ游离未端. RecA可促进分枝移动。 RuvA和RuvB可促进异源双链的形成。 RuvC是一种内切酶,可释放重组中间体。 细菌中重组分子事件的程序 (1)由断裂分子产生的单链与非姊妹染色单体的双链相互作用； (2)配对区的延伸； (3)外切酶解离配对的双链。 chi 位点5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5 在E.coli中每隔约5~10 kb有一个拷贝，但其它遗传因子中无此拷贝 RecBCD介导的解旋和剪切产生3‘游离末端，用来起始异源双链的连接。 单链取代(single-strand uptake) 可发生在各种形状的DNA分子之间，但要具备3个条件： (1)其中一个DNA 分子要有单链区； (2)其中一个DNA 分子要有游离的3末端； (3)单链区和3‘末端可和另一DNA分子互补。 RecA可催化单链取代。 RecBCD的活性： (1)强的核酸酶；(2)解旋酶；(3)ATPase。 RecBCD 提供带有游离末端的单链区 RceA有两个完全不同类型的活性： （1）在SOS反应中它能具有蛋白酶活性 （2）能启动DNA单链和与之互补的双链分 子进行碱基配对。 RuvA可识别 Holidy的连接结构 RuvB是ATPase,可发动迁移反应 RecG是解旋酶 RuvC,它编码内切酶可特异识别Hollidy分枝，它在体外可切这个连接体，解离重组中间体。 重组修复的分子机制 第五节 位点特异性重组 一．λ在aat位点的整合 二．倒位重组 沙门氏细菌（Salmo